[发明专利]一种电化学发光酶联免疫传感器及其制备方法与应用

说明书

一种电化学发光酶联免疫传感器及其应用，该电化学发光酶联免疫传感器由以下方法制备而成：首先在ITO电极上合成介孔二氧化硅，再将介孔二氧化硅电极和纸质盖片贴合，然后将生物素标记抗体、碱性磷酸酶标记的抗体，与抗原反应，形成抗原抗体复合物，再加入亲和素磁珠分离所述抗原抗体复合物，最后再加入底物磷酸苯二钠反应后，检测生成的苯酚，待测物的含量与生成的苯酚成正比，从而构建成电化学发光酶联免疫传感器。本发明电化学发光酶联免疫传感器可应用于不同浓度不同临床生物标志物检测，可简便快速的调节检测范围，具有更低的检测限和更宽的检测范围，在实现含量相差较大的多组分同时检测领域具有着广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及免疫分析技术领域，具体涉及一种可调节检测范围的电化学发光酶联免疫传感器及其制备方法与应用。

背景技术

临床生物标志物在疾病诊断、治疗、病情检测、预后判断和疗效评价等方面具有重要意义。多种临床生物标记物的联合使用，可为临床诊断和治疗提供可靠的信息。但是，临床生物标记物的丰度范围广泛，从pg/mL到/mL水平不等。

目前，许多检测方法被应用于临床生物标志物的检测，包括酶联免疫分析法，免疫化学发光分析、免疫胶体金和荧光免疫分析。这些方法存在成本昂贵，仪器结构复杂，技术要求高，检测时间长，检测范围窄等缺点。电化学发光传感器由于其具有高灵敏度、简单易操作和易于小型化等特点，为设计高灵敏度的免疫传感器提供了一种选择。

已经构建的电化学发光免疫传感器大多灵敏度低，检测范围窄。

CN104849442A公开了一种检测爱德华氏菌病抗体的电化学发光免疫传感器，该文献报道了一种基于Nafion膜固定失活爱德华氏菌的电化学发光传感器的构建方法，可实现爱德华氏病抗体的检测。该方法通过标记在抗体的葡萄糖氧化酶催化葡萄糖生成过氧化氢，促使产生电化学发光，但是，该方法检测范围为7-800 /mL，灵敏度低，检测范围窄。

介孔二氧化硅（简称“介孔硅”或“SANs”）是一种直径约2-3 nm的垂直于基底的纳米材料，由于其具有尺寸筛分能力和电荷选择性，广泛用于电化学发光传感器的构建。但目前没有基于介孔二氧化硅的高灵敏，可调节检测范围的电化学发光酶联免疫传感器的相关报道。

因此，亟待发展不同浓度范围的多种临床生物标记物免疫分析新方法与新技术。

发明内容

本发明要解决的技术问题是，克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种可调节检测范围，灵敏度高，可进行不同浓度范围的多指标同时检测的电化学发光酶联免疫传感器。

本发明解决其技术问题采用的技术方案是，一种电化学发光酶联免疫传感器，由以下方法制备而成：首先在氧化铟锡（ITO）电极上合成介孔二氧化硅，再将介孔二氧化硅电极和纸质盖片贴合，然后将生物素标记抗体、碱性磷酸酶标记的抗体，与抗原反应，形成抗原抗体复合物，再加入亲和素磁珠分离所述抗原抗体复合物，最后再加入底物磷酸苯二钠反应后，检测生成的苯酚，待测物的含量与生成的苯酚成正比，从而构建成电化学发光酶联免疫传感器。

进一步，所述电化学发光酶联免疫传感器，制备方法包括以下具体步骤：（1）将定制的氧化铟锡（ITO）电极切割成1-5 cm × 1-5 cm尺寸大小，用含0.1-2 M（优选0.5-1.0）NaOH的乙醇溶液浸泡1-26 h（优选18-24 h），依次用丙酮、乙醇和去离子水各超声清洗1-30min（优选10-20 min），然后用氮气吹干；