[发明专利]一种Hep-HA复合多孔材料的制备方法及其在构建根管内置支架中的应用

说明书

本发明属于生物材料制备技术领域，具体涉及一种Hep‑HA复合多孔材料的制备方法及其在构建根管内置支架中的应用，本发明将肝素置于2‑(N‑吗啉代)乙磺酸(MES)缓冲液中，加入1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺(EDC)、N‑羟基琥珀酰亚胺(NHS)；再将透明质酸加入至上述的活化肝素溶液中；经均匀搅拌、透析纯化、冷冻成形和冷冻干燥后制备得到一种Hep‑HA复合多孔材料，采用上述的Hep‑HA复合多孔材料制备得到一种可置入牙根管内的预成型支架，采用本发明方法制备的可置入牙根管内预成型支架的形态和结构可以调控，产率较高，工艺简单，操作方便。

技术领域

本发明属于生物材料制备技术领域，具体涉及一种Hep-HA复合多孔材料的制备方法及其在构建根管内置支架中的应用。

背景技术

目前，牙髓再生是牙体牙髓领域研究的热点问题之一，牙髓组织再生需要种子细胞、生长因子和支架共同参与来完成，然而，由于根管特殊解剖结构的限制和根管环境的特殊性，这严重阻碍了牙髓再生研究的进展，因此，构建适合根管形态且方便应用的根管内置支架是牙髓再生研究面临的巨大挑战之一。

研究表明，复合多孔材料具有三维立体微孔结构而在组织工程、药物载体、生物医学等多领域内得到广泛的应用，也因此受到众多组织工程研究者的关注。其中，方便置入根管内的预成型支架有望促进牙髓组织的再生，这方面的研究已成为了本领域的研究热点。透明质酸(Hyaluronic acid，HA)是一种可降解的高分子生物材料，属于线性糖胺聚糖，并且是人体中细胞外基质的主要成份，在天然组织中调控细胞增殖、分化和运动，同时具有非免疫原性、非抗原性、良好生物相容性和生物学活性；HA基生物材料和生物支架不会引发过敏或炎症，并且是亲水性的。肝素(Heparin，Hep)是一种抗凝剂，是由两种多糖交替连接而成的黏多糖硫酸脂，在体内、外都具有抗凝血的作用，另一方面，肝素可以结合生长因子而发挥控释生长因子的作用。基于上述这些天然高分子材料的复合多孔支架在纺织、临床、兽医学、医学、卫生和农业等领域均有较好的应用前景，因其具有形态和结构的可塑性而有望以其构建适应根管解剖特点的支架，目前在牙髓组织再生领域尚未有关于应用Hep-HA制备根管内置预成型支架的报道。

发明内容

为了克服上述现有技术的不足，本发明的首要目的是提供一种Hep-HA复合多孔材料的制备方法，所制备得到的产物具有复合多孔结构，包含透明质酸和肝素(可结合生长因子)两种成份，可用作牙髓再生支架的制作材料。

本发明的第二个目的是提供采用上述制备方法制备得到的Hep-HA复合多孔材料。

本发明的第三个目的是提供一种可置入牙根管内的预成型支架，该支架由上述的Hep-HA复合多孔材料制备而成，便于置入根管，有望作为牙髓再生支架。

本发明的第四个目的是提供上述的可置入牙根管内的预成型支架的制备方法。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

本发明提供一种Hep-HA复合多孔材料的制备方法，具体包括以下步骤：

S1、将肝素(Hep)置于2-(N-吗啉代)乙磺酸(MES)缓冲液中，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，活化Hep；

S2、将透明质酸(HA)加入到步骤S1的混合液中，搅拌均匀；

S3、步骤S2的混合液经透析、冷冻成形以及干燥后得到Hep-HA复合多孔材料。

优选地，所述MES缓冲液的pH为4-5，摩尔浓度为0.05mol/L-0.1mol/L。进一步的，所述MES缓冲液的pH为4.5，摩尔浓度为0.05mol/L。

优选地，所述Hep、EDC与NHS的摩尔比为1:(1-3):(1-3)。