[发明专利]与黄瓜长下胚轴基因lh1连锁的Indel标记及其引物、试剂盒与应用

权利要求书

1.与黄瓜长下胚轴基因lh1连锁的Indel标记，其特征在于，野生型黄瓜正常长度下胚轴基因Lh1 对应连锁片段的核苷酸序列如Seq ID No.1所示；所述Indel标记在Seq IDNo.1所示核苷酸序列的第31-34 位点存在碱基缺失突变；所述缺失突变的碱基为ACTC；带有所述Indel标记的黄瓜表现为长下胚轴；所述Indel 标记的核苷酸序列如 Seq ID No.2所示。

2.检测与黄瓜长下胚轴基因lh1连锁的Indel标记的引物对在筛选黄瓜长下胚轴种质资源中的应用，其特征在于，所述Indel标记在Seq ID No.1所示核苷酸序列的第31-34 位点存在碱基缺失突变；所述缺失突变的碱基为ACTC；带有所述Indel标记的黄瓜表现为长下胚轴；所述引物对的序列如下所示：

LH1-INDEL2-F:AGAGTCCTTTGAGTGGTATACG

LH1-INDEL2-R: AGAACAACTCACCCATCATCAA；

所述Indel 标记的核苷酸序列如 Seq ID No.2 所示。

3.一种鉴定携带有黄瓜长下胚轴基因 lh1 的黄瓜种质资源的方法，其特征在于，采用权利要求2中所述的引物对对待测黄瓜材料进行PCR检测，对 PCR 产物进行电泳和/或测序；如果电泳结果为 166bp 和/或测序结果如 Seq ID No.1 所示，则所测的黄瓜材料的基因型为正常长度下胚轴基因 Lh1，表现型为正常长度下胚轴，

如果电泳结果为 162bp 和/或测序结果如 Seq ID No.2 所示，则所测的黄瓜材料的基因型为长下胚轴基因 lh1，表现型为长下胚轴；所述电泳指非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，

所述PCR的体系包括： DNA 模板，正向和反向引物，Taq Master Mix。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述PCR 的体系为：7.5ng DNA 模板，正向和反向引物各50ng，5μL Taq Master Mix，加双蒸水至10μl；

所述 DNA 模板为待测黄瓜材料的 DNA。

6.根据权利要求3-5任一所述的方法，其特征在于，所述PCR 的程序为：95℃预变性3分钟；以95℃变性15 秒，57℃退火15 秒，72℃延伸30 秒为1 个循环，共35 个循环；72℃保温5 分钟。

7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述电泳指将PCR 产物用6%非变性聚丙烯酰胺凝胶分离。

8.根据权利要求3或7所述的方法，其特征在于，电泳条件为150V恒功率电泳分离1h10min，电泳后银染显色。