[发明专利]一种猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗免疫增强剂及其制备方法

权利要求书

1.一种猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗免疫增强剂，其特征在于：所述免疫增强剂包括0.15-1.2mg/mL的单磷酰脂质A、0.5-0.9mg/mL 的β-葡聚糖和10-50mg/mL 的猪源细胞质多肽；按质量份数所述单磷酰脂质A为6-12份、β-葡聚糖7-11份和猪源细胞质多肽10-18份；所述猪源细胞质多肽的制备方法，包括以下步骤：

S1、取新鲜的猪源性组织使用去离子水清洗、分割，加入去离子水高速绞碎成浆液；

S2、在浆液中加入总质量1-2%的氯化钠，加热到80-100℃下溶解，然后进行抽滤，收集滤液，得到第一滤液和滤渣；

S3、向第一滤液中加入第一滤液总重量2-3%的2709碱性蛋白酶和第一滤液总重量1-2%猪源细胞质多肽提取剂，在温度为55-65℃，pH为8-9的条件下间歇搅拌，酶解提取5-7h，得到第一酶解提取液，所述猪源细胞质多肽提取剂，按体积份数，包括磷酸溶液1-2份、乙腈溶液2-3份、甲醇溶液0.5-0.8份和三氟乙酸0.2-0.6份组成的混合溶液；

S4、在滤渣中加入与滤渣等质量的去离子水，然后加入2709碱性蛋白酶调节混合液的pH为8-9，再加入总质量4-6％的猪源细胞质多肽提取剂，将其控制在45-50℃的温度下酶解提取5-7h，得到第二酶解提取液；

S5、将第一酶解提取液和第二酶解提取液混合，在45-50℃的温度下酶解提取1-2h，然后抽滤，收集滤液，得到第二滤液；

S6、在第二滤液中加入第二滤液质量2-3％的活性炭，搅拌反应50-70min，滤出活性炭，调节滤液pH为7，先经蒸发浓缩，再经过干燥后得到猪源细胞质多肽。

2.根据权利要求1所述的一种猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗免疫增强剂，其特征在于：所述免疫增强剂包括0.65mg/mL的单磷酰脂质A、0.75mg/mL的β-葡聚糖和25mg/mL的猪源细胞质多肽；按质量份数所述单磷酰脂质A为9份、β-葡聚糖9份和猪源细胞质多肽14份。

3.根据权利要求2所述的一种猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗免疫增强剂，其特征在于：所述免疫增强剂为油乳剂。

4.一种如权利要求1-3任一权利要求所述的猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗免疫增强剂的制备方法，其特征在于：将含有单磷酰脂质A、猪源细胞质多肽和β-葡聚糖的混合液与吐温-80混合，得到水相溶液；然后将白油和司盘-80混合，得到油相溶液；最后将水相溶液与油相溶液混合乳化后，得到灭活疫苗免疫增强剂。

5.根据权利要求4所述的一种猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗免疫增强剂的制备方法，其特征在于：所述吐温-80的体积为单磷酰脂质A、猪源细胞质多肽和β-葡聚糖的混合液体积的1.5-2倍，所述白油和司盘-80的体积比为1:3，所述白油和司盘-80油相溶液的体积与吐温-80的体积相等。

6.根据权利要求5所述的一种猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗免疫增强剂的制备方法，其特征在于：所述猪源细胞质多肽提取剂，按体积份数，包括磷酸溶液1.5份、乙腈溶液2.5份、甲醇溶液0.65份和三氟乙酸0.4份组成的混合溶液。