[发明专利]环糊精接枝物-细菌固定化细胞多孔胶珠及其应用

权利要求书

1.一种环糊精接枝物-细菌固定化细胞多孔胶珠，特征在于，所述环糊精接枝物-细菌固定化细胞多孔胶珠是将海藻酸钠、环糊精-羧甲基纤维素接枝物、细菌静息细胞和氧化石墨烯按比例在水中混合均匀后滴入金属离子溶液中成球而制成的。

2.如权利要求1所述的一种环糊精接枝物-细菌固定化细胞多孔胶珠，其特征在于，所述海藻酸钠：环糊精-羧甲基纤维素接枝物：氧化石墨烯：细菌静息细胞的重量比为1：1-10：0.1-1：1-53。

3.如权利要求2所述的一种环糊精接枝物-细菌固定化细胞多孔胶珠，其特征在于，氧化石墨烯占水的0.1％-1％。

4.权利要求1-3任意一项所述环糊精接枝物-细菌固定化细胞多孔胶珠的制备方法，特征在于，步骤如下：

(1)取氧化石墨烯粉末加入装有水的烧杯中，超声分散，将环糊精-羧甲基纤维素接枝物、细菌静息细胞和海藻酸钠加到超声分散均匀的氧化石墨烯水溶液中，搅拌反应，静置脱泡；

(2)用注射器将步骤(1)混合溶液滴入到含有金属阳离子的溶液中，固定后，用反应溶液洗涤，即得环糊精接枝物多孔胶珠。

5.如权利要求4所述的制备方法，特征在于，步骤(1)反应温度为10-30℃，搅拌时间为0.5-3h；搅拌速度为50-300rpm。

6.如权利要求4所述的制备方法，特征在于，环糊精-羧甲基纤维素接枝物的制备方法如下：按环糊精与羧甲基纤维素按质量比1:0.5-5称取，加入2％-15％的氢氧化钠溶液中，搅拌溶解；按环氧氯丙烷与氢氧化钠溶液体积比为0.2-1:5加入环氧氯丙烷，搅拌直至成凝胶状，停止搅拌，升高温度至50-70℃保持2-6h；产物用大量蒸馏水和乙醇交替洗涤，直至洗出液为中性，并且至洗出液中无环氧氯丙烷及无环糊精；干燥至恒重，研磨成粉末。

7.如权利要求6所述的制备方法，特征在于，所述环糊精和羧甲基纤维素的质量总和在氢氧化钠溶液中的浓度为0.12-0.3g/ml。

8.如权利要求4所述的制备方法，特征在于，所述金属阳离子选自Ba²⁺，Ca²⁺，Co²⁺，Ni²⁺，Zn²⁺，Mn²⁺，Fe²⁺中的一种或几种的任意组合；所述金属阳离子浓度为0.1-0.5mol/L；固定时间为1-6h。

9.权利要求1-3任意一项所述环糊精接枝物-细菌固定化细胞多孔胶珠在甾体药物生物催化过程中的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，具体为，在甾体药物生物催化过程中，将所述环糊精接枝物-细菌固定化细胞多孔胶珠作为促溶剂和生物催化剂，按照胶珠质量与反应体系体积1:1-3添加到反应体系中，反应结束后，进行过滤，滤液用于收集反应产物，过滤物即环糊精接枝物-细菌固定化细胞多孔胶珠，使用反应溶液洗涤1-10次后，重新用于甾体药物生物催化反应，实现环糊精介质的循环利用。

11.如权利要求10所述的应用，其特征在于，所述多孔胶珠可通过再次固定延长循环利用的次数，所述的固定方法具体如下：将催化效率降低的多孔胶珠胶珠10g，投入到30mL发酵培养基进行活化，160r/min，32℃的摇床下振荡培养20h；

所述的发酵培养基为发酵培养菌体时使用的培养基；

培养结束后将发酵液过滤得到胶珠，用反应溶液将胶珠洗涤干净后，将其置于金属阳离子溶液中再次固定2h，反应溶液洗涤收集胶珠，置于4℃冰箱中保存备用。

12.如权利要求1所述的一种环糊精接枝物-细菌固定化细胞多孔胶珠，其特征在于，所述的环糊精为β-环糊精，HP-β-环糊精,RM-β-环糊精或SBE-β-环糊精。