[发明专利]一种用于多发性骨髓瘤的双特异性抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种用于多发性骨髓瘤的双特异性抗体及其应用，属基因工程抗体技术领域。本发明以靶向人BCMA的抗体F00和靶向人PD‑1的抗体D00为亲本抗体，依据CrossMab平台利用基因工程技术在两个重链Fc上分别引入‘knob’和‘hole’端，哺乳动物真核表达体系表达DF00。本发明还提供表达和纯化双特异性抗体DF00的方法，通过HEK293细胞分泌表达，亲和层析纯化获得目的蛋白。此双特异性抗体DF00能够特异性同时结合于多发性骨髓瘤（MM）细胞表面的BCMA分子和活化的T细胞表面免疫检查点分子PD‑1，抑制肿瘤中免疫抑制的微环境且将T细胞募集至多发性骨髓瘤细胞周围，重塑T细胞杀伤MM细胞的功能。

技术领域

本发明属于基因工程抗体技术领域，具体涉及一种新型可以同时靶向人B细胞成熟抗原(B-cell maturation antigen，BCMA)和免疫抑制分子程序性死亡受体1(programmed cell death protein 1，PD-1)的双特异性抗体DF00，其可利用双靶向性将表达有PD-1抗原的T细胞募集至高表达BCMA的多发性骨髓瘤细胞周围，同时抑制免疫抑制的微环境，重塑T细胞对多发性骨髓瘤细胞的杀伤作用。

背景技术

肿瘤免疫治疗是指应用免疫学原理和方法，通过激活体内的免疫细胞和增强机体抗肿瘤免疫应答，特异性地清除肿瘤微小残留病灶、抑制肿瘤生长，打破免疫耐受的治疗方法。肿瘤免疫治疗就是要克服肿瘤免疫逃逸的机制，从而重新唤醒免疫细胞来清除癌细胞。由于其副作用小、治疗效果明显，正逐渐成为未来肿瘤治疗的发展方向，被称为继手术、放疗和化疗之后的第四大肿瘤治疗技术。免疫调节策略的有效性取决于基线免疫应答的存在和预先存在的免疫释放，因此效应T细胞在抗肿瘤反应中起中心作用已经达成了普遍共识。

(一)多发性骨髓瘤与肿瘤相关抗原BCMA

多发性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)是一种终末分化浆细胞的恶性肿瘤，患者多见于血清或尿液中的克隆浆细胞和单克隆蛋白的骨髓浸润。多发性骨髓瘤的诊断是在明确的终末器官损害可归因于浆细胞增殖障碍或当发现表明其发展的高可能性存在。从意义不明的单克隆免疫球蛋白增多症(MGUS)的前驱阶段和郁积性多发性骨髓瘤中鉴别需要治疗的症状性多发性骨髓瘤是重要的，因为观察是这些情况的标准。在过去十年中，在疾病生物学和个体化治疗方法的认识方面取得了很大进展。一些新的药物，如蛋白酶体抑制剂和免疫调节药物，已经加入了传统的治疗手段(皮质类固醇、烷基化剂和蒽环类药物)，并与高剂量治疗和自体造血干细胞移植一起，导致了更深入和持久的临床反应。但大多数MM最终由于耐药性的发展而复发。因此，迫切需要新的治疗策略，特别是在高危复发和难治性多发性骨髓瘤。

BCMA是一种跨膜糖蛋白和非酪氨酸激酶受体，属于肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族，几乎仅在浆母细胞和浆细胞中表达。在非恶性淋巴样组织中，在生发中心的滤泡间的区域检测到了BCMA蛋白，但在滤泡外套区未检测到。与其他两个功能相关的TNFR B细胞活化因子受体(BAFF-R)和跨膜活化剂以及钙调节剂和亲环素配体相互作用物(TACI)不同，BCMA在致力于浆细胞分化的晚期记忆B细胞中被独特诱导，并存在于所有浆细胞中。相反，除了相比于相同个体的浆细胞具有显著更低BCMA表达的浆细胞样树突状细胞(pDC)，其他正常组织检测不到的BCMA转录本。使用组织基因表达谱和免疫组化以及流式细胞术分析进行的多项独立研究表明BCMA转录本和蛋白质在浆细胞中强表达，而在正常组织中由于浆细胞的强表达而检测表达微弱。MM细胞中依赖BCMA的生物学作用主要受关键的生长和生存蛋白激酶B(AKT)，MAPK和核因子(NF)-κB信号级联调控。BCMA过表达不仅诱导MM细胞的生存与增殖，同时也会诱导MM细胞上免疫抑制因子(PD-L1，IL10，TGFβ等)的上调，形成免疫抑制的微环境。因此BCMA已成为用于多发性骨髓瘤的新型免疫治疗方式被靶向的理想抗原。

(二)PD-1/PD-L1免疫检查点与骨髓微环境免疫抑制