[发明专利]神经母细胞瘤原位模型的建立方法

权利要求书

1.一种神经母细胞瘤原位模型的建立方法，其特征在于，包括：

S10、按1:1比例将MEM培养基和F12培养基混合制成培养基混合液，将神经母细胞瘤接种于所述培养基混合液中进行细胞培养；

S20、将培养后的神经母细胞瘤进行稀释，制成细胞悬液；

S30、取用所述细胞悬液注入C57BL/6小鼠的颅骨周边，并将所述C57BL/6小鼠进行培养，当神经母细胞瘤的体积k处于2.2cm³至3.5cm³之间时，确定得到神经母细胞瘤原位模型。

2.根据权利要求1所述的神经母细胞瘤原位模型的建立方法，其特征在于，所述S10中，具体包括：

S11、采用青霉素100-200ug/ml、链霉素100-200ug/ml、10-15ng/mL人表皮生长因子、10-15ng/mL血管内皮生长因子、两性霉素2.5-5μg/ml、MEM培养基0.2-0.5mg/L及F12培养基0.1-0.25mg/L进行配比，以制成所述培养基混合液；

S12、将具有荧光素酶的神经母细胞瘤接种至所述培养基混合液重悬，在37℃、5％CO2的环境中培养。

3.根据权利要求2所述的神经母细胞瘤原位模型的建立方法，其特征在于，所述S12中，具体包括：

S121、采集患者神经母细胞瘤并通过100mL/L中性甲醛固定6～24h；

S122、通过经常规组织处理进行HE染色，在所述神经母细胞瘤中至少具有50个橙绿信号总数时，确定为所述具有荧光素酶的神经母细胞瘤；

S122、将所述具有荧光素酶的神经母细胞瘤接种至所述培养基混合液重悬，并37℃、5％CO2的环境中进行传代培养3-4天，使其传代至10-20代。

4.根据权利要求1所述的神经母细胞瘤原位模型的建立方法，其特征在于，所述S20中，具体包括：将培养后的所述神经母细胞瘤通过PBS缓冲液漂洗，并注入消化液消化成单细胞，将所述单细胞离心之后再采用所述PBS缓冲液漂洗，以制成所述细胞悬液。

5.根据权利要求4所述的神经母细胞瘤原位模型的建立方法，其特征在于，所述单细胞的离心条件为：800rpm离心6min。

6.根据权利要求4所述的神经母细胞瘤原位模型的建立方法，其特征在于，所述消化液中含有0.1％浓度的胶原酶和0.25％胰酶。

7.根据权利要求1所述的神经母细胞瘤原位模型的建立方法，其特征在于，所述S30中，具体包括：

S31、将所述C57BL/6小鼠的颅骨周边缓慢注入0.35-0.55ml所述细胞悬液，并进行消毒；

S32、将所述C57BL/6小鼠在37℃、5％CO2的培养箱中进行培养4-5周；

S33、在培养后通过预定的体积计算公式计算所述C57BL/6小鼠的神经母细胞瘤的体积k，以判断所述体积k是否处于2.2cm³至3.5cm³之间。

8.根据权利要求7所述的神经母细胞瘤原位模型的建立方法，其特征在于，所述预定的体积计算公式为：

其中，v_n表示单个神经母细胞瘤的体积，L_n单个神经母细胞瘤的最长直径，W_n表示单个神经母细胞瘤的最长横径。

9.根据权利要求7所述的神经母细胞瘤原位模型的建立方法，其特征在于，所述C57BL/6小鼠为雌性、4周龄、重量为13-15g。