[发明专利]拟穴青蟹致敏蛋白Scy p 1衍生物及其应用

说明书

本发明提供了一种拟穴青蟹致敏蛋白Scy p 1衍生物及其应用，所述衍生物的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。根据本发明的拟穴青蟹致敏蛋白Scy p 1衍生物，其是将野生型Scy p 1氨基酸序列的N端、C端及2个关键线性表位区域删除。通过重叠延伸PCR技术扩增获得Scy p 1衍生物基因序列；连接转化BL21宿主细胞中诱导表达；表达的衍生物经Ni柱纯化，分析改造前后的Scy p 1对肥大细胞脱颗粒的影响。与野生型Scy p 1相比，Scy p 1衍生物能显著性降低LAD2细胞β‑氨基己糖苷酶的释放，有望用于免疫治疗或免疫预防，减少免疫治疗中的副作用，以提高治疗的安全指数。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种拟穴青蟹过敏蛋白Scy p 1衍生物及其应用。

背景技术

食物过敏是由IgE介导的速发型超敏反应。目前，食物过敏在全球的发病率与死亡率呈现逐年增加的趋势，已经成为全球性的公共卫生问题。联合国粮农组织及世界卫生组织指出：90％以上的食物过敏都是由奶、蛋、鱼、豆、花生、小麦、坚果以及甲壳类水产品这八大类食物引起的。

甲壳类水产品中拟穴青蟹(Scylla Paramamosain)又名青蟹，是具有重要的经济价值和营养价值，深受广大消费者喜欢，但每年有很多人因食用水产品而过敏。与其它食物过敏不同，甲壳类水产品通常会伴随终生，严重影响着易感人群的生活状态。

目前，过敏原特异性免疫治疗法已成为治疗由IgE介导的过敏性疾病的常用方法，其主要是借助于脱敏制剂的使用。简单地说，就是通过脱敏制剂产生的特异性抗体来起到竞争阻断的作用，从而达到改善过敏病人过敏症状的目的。利用低致敏性的过敏原制剂，可以大大减少免疫治疗中的副作用，提高治疗的安全指数。

近年来，抗原特异性疗法已相继在虾、鱼、花粉致敏蛋白改造中被报道，但关于蟹中致敏蛋白的改造少见报道。Scy p 1是蟹类主要过敏原，且作为无脊椎动物中的广泛过敏原，能够引起不同物种间的交叉反应。因此，对蟹中致敏蛋白的改造仍有待研究。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决上述技术中的技术问题之一。为此，本发明的第一个目的在于提供一种拟穴青蟹致敏蛋白Scy p 1衍生物。

本发明的第二个目的是提出一种编码拟穴青蟹致敏蛋白Scy p 1衍生物的基因。

本发明的第三个目的是提出一种重组载体。

本发明的第四个目的是提出一种制备拟穴青蟹致敏蛋白Scy p 1衍生物的方法。

本发明的第五个目的是提出一种拟穴青蟹致敏蛋白Scy p 1衍生物的应用。

在本发明的第一个方面中，提供了一种穴青蟹致敏蛋白Scy p 1衍生物，所述衍生物的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。根据本发明的实施例，利用分子改造技术对Scy p 1的IgE线性表位进行表位删减，该衍生物能显著性降低LAD2细胞β-氨基己糖苷酶的释放，可用于免疫治疗或免疫预防。

可选地，所述衍生物是将Scy p 1氨基酸序列的N端、C端及2个关键线性表位区域删除。

在本发明的第二方面中，提供了一种编码拟穴青蟹致敏蛋白Scy p 1衍生物的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；野生型变应原相比，其碱基数1-36，301-375，830-858处被删减了。

在本发明的第三个方面中，提供了一种重组载体，其包含编码上述拟穴青蟹致敏蛋白Scy p 1衍生物的基因。

在本发明的第四方面中，根据本发明实施例，提供了一种制备拟穴青蟹致敏蛋白Scy p 1衍生物的方法，包括以下步骤：