[发明专利]一种用于肿瘤干细胞培养的压应力加载装置及其应用方法

权利要求书

1.一种用于肿瘤干细胞培养的压应力加载装置，其特征在于：包括培养盒和压力控制装置；所述培养盒具有培养腔且培养腔上部活动连接有盒盖，培养腔内装有至少一个培养板，所述培养板上设置有多个用于容纳培养基和包埋有肿瘤干细胞的凝胶球的孔位；所述压力控制装置包括气管、微调针阀、安全阀及压力表，所述压力控制装置通过四通连接件的第一端与盒盖连接并与培养腔连通，所述气管与四通连接件的第二端连接，所述安全阀与四通连接件的第三端连接，所述压力表与四通连接件的第四端连接，所述微调针阀设置在气管上，以控制气体的进出。

2.根据权利要求1所述的用于肿瘤干细胞培养的压应力加载装置，其特征在于：所述盒盖与培养盒之间设置有硅胶密封圈。

3.根据权利要求2所述的用于肿瘤干细胞培养的压应力加载装置，其特征在于：所述硅胶密封圈通过螺丝固定在盒盖上。

4.根据权利要求1或2所述的用于肿瘤干细胞培养的压应力加载装置，其特征在于：所述盒盖为透明的有机玻璃盒盖。

5.根据权利要求1或2所述的用于肿瘤干细胞培养的压应力加载装置，其特征在于：所述培养板为六孔板。

6.根据权利要求1或2所述的用于肿瘤干细胞培养的压应力加载装置，其特征在于：所述培养盒为不锈钢盒体。

7.如权利要求1～6中任一项所述的用于肿瘤干细胞培养的压应力加载装置的应用方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1、制备包埋有肿瘤干细胞且具有不同基质刚度的多种凝胶球，备用；

S2、向培养板的孔位中注入细胞培养液，将步骤S1制得的凝胶球按照基质刚度的不同分别置于培养板的不同孔位中；

S3、将装有凝胶球和细胞培养液的培养板置于培养盒的培养腔内，关闭盒盖并使培养盒完全密封；将空压机与压应力加载装置的气管连接，检查气密性后向培养盒内输送气体，直至培养盒内的气压达到预设值，关闭微调针阀以停止进气，将压应力加载装置转移至恒温箱进行培养；

S4、通过显微镜观察片上凝胶球内肿瘤干细胞的细胞生物学行为。

8.根据权利要求7所述的用于肿瘤干细胞培养的压应力加载装置的应用方法，其特征在于：所述步骤S1具体包括以下步骤：

a.根据所需的基质刚度计算明胶的用量；将明胶加入到PBS溶剂中，50～60℃下水浴锅加热溶解，边加热边搅拌，并趁热过滤除菌；将转谷氨酰胺酶溶于PBS溶剂中，配成浓度为10％的转谷氨酰胺酶溶液，过滤除菌；

b.按照明胶溶液：转谷氨酰胺酶＝1:50的体积比，向明胶溶液中加入转谷氨酰胺酶溶液，混合均匀，得到酶交联明胶混合液；

c.将肿瘤干细胞加入到步骤b的酶交联明胶混合液中并混匀，用注射器将其注入冰的矿物油中，待凝固即得包埋有肿瘤干细胞的凝胶球。