[发明专利]一株芽孢杆菌W608及其在防治油菜菌核病中的应用

说明书

本发明提供一株芽孢杆菌（Bacillus sp.）W608及其在防治油菜菌核病中的应用，所述菌株已于2020年07月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2020335。本发明所述菌株的发酵上清液的制备工艺简单，抑真菌谱广，生防效果好。在油菜菌核病（核盘菌）的田间防治试验中显示出较好的生物防治效果，防效可达57%以上。

技术领域

本发明涉及芽孢杆菌，尤其是涉及一种芽孢杆菌（Bacillus sp.）W608及其在制备防治油菜菌核病发酵上清液中的应用。

背景技术

长期以来化学农药一直是植物病害防治的主要方式，它对农业生产上防治病虫害起到了十分重要的作用，但长期不合理使用化学农药产生了药物残留、环境污染及病原耐药性增加等诸多问题。因此，开发对人类和环境友好、防治效果优良的植物病害防治新策略尤为重要。生物防治是利用微生物或其活性产物来防治农作物病虫害，具有安全高和防治效果好的优点，已经成为当前控制农作物病虫害的重要途径，其中活性微生物筛选是至关重要的环节。

深远海作为远离陆地，面积广阔的海域，具有独立的潮汐系统和强大的洋流系统，而且高压、低温、黑暗、高盐、寡营养的深海极限环境使得生长于该区域的微生物在适应极端环境过程中形成了特殊的生理代谢和防御机制。因而，这些深海微生物可能是结构新颖、活性优良天然产物的重要来源，开发利用高活性深海微生物或其活性产物已成为当前海洋生物资源研发的热点之一。

芽孢杆菌（Bacillus sp.）因能产生耐热抗逆的芽孢，所以是土壤和植物微生物生态的优势种群。同时由于芽孢杆菌具有内生芽孢、抗逆性强、繁殖速度快、营养要求简单和易于在植物根部定殖的特点，使其在植物病害生物防治中被加以应用。例如，由美国Gustafson公司开发的命名为GBO3的芽孢杆菌能有效防治Fusarium和Rhizoctonia引起的植物病害，与此同时其还具有防病和促进植物生长的作用。江苏省农业科学院筛选获得的Bacillus sp.916菌株对水稻白叶枯病具有显著的防治效果。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一株芽孢杆菌（Bacillus sp.）W608。

本发明的目的之二在于提供一株芽孢杆菌（Bacillus sp.）W608在制备防治油菜菌核病发酵上清液中的应用。

所述芽孢杆菌（Bacillus sp.）W608分离自中国第31次大洋科学考察所采集的深海沉积物样品（152º57′3012′′W，6º44′9371′′N）；该菌已于2020年07月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为中国，武汉，武汉大学，邮编430072，保藏编号为CCTCC NO：M2020335。

所述芽孢杆菌（Bacillus sp.）W608通过聚合酶链式反应（PCR）扩增16S rDNA序列，与美国国家生物技术信息中心（NCBI）GenBank数据库中相应的序列进行比对分析，发现其与芽孢杆菌属（Bacillus sp.）细菌具有99%的序列相似性。

所述防治油菜菌核病发酵上清液的制备方法如下：首先将芽孢杆菌（Bacillus sp.）W608在含有5 mL LB培养基的试管中进行活化培养，然后将活化的菌株接种到500 mLLB培养基中进行发酵培养，发酵培养结束后离心除去菌体，得到防治油菜菌核病发酵上清液。

所述离心除去菌体是在10,000 r/min下离心15～20min。

所述活化培养的时间为12-24 h。