[发明专利]竹柏叶中甾体类化合物及其提取方法和用途

说明书

本发明提供了一种竹柏叶中提取分离化合物A和B的方法，通过对竹柏叶的提取液进行初步纯化(如柱分离、制备板分离等)后，然后重结晶，并通过挑选不同的晶体得到高纯度的A和B化合物。通过该方法成功从竹柏叶中分离获得了2个甾体类化合物，这两种化合物对多种癌细胞(如胃癌细胞株、大肠癌细胞株和乳腺癌细胞株)均具有很强的抑制活性。此外本发明提供的提纯化合物的方法能够快速准确的获取高纯度的目标化合物，对含有复杂成分的植物提取液中具体化合物的快速分离和鉴定具有重要意义。

技术领域

本发明属于医药技术领域。具体涉及从竹柏叶中分离获得的甾体类化合物及其提取方法和在治疗肿瘤/癌症方面的用途。

背景技术

癌症已成为世界范围内最重要的致死性疾病之一。癌症可于任何年龄在各种器官及组织中发生，导致死亡的主要癌症种类有：肺癌、胃癌、肝癌、结肠癌和乳腺癌等。虽然部分小分子抗癌药物已用于临床，部分化合物正在进行临床前的研究。然而大部分癌症患者发觉病情时已是中期至晚期，临床治疗总体效果较差，尤其是多药耐药性癌细胞的不断出现，使得癌症的治疗困难重重。因此，开发出活性高、副作用低的新型抗癌药物来满足临床的需求迫在眉睫。

中药在我国用药历史悠久，毒副作用相对较低。从中药中发现新的候选药物或先导药物是当今药物研发的主流，尤其是对民族中药的深入开发。

竹柏(Podocarpus nagi)，罗汉松科(Podocarpaceae)罗汉松属(Podocarpus)植物，在民间则有山杉、糖鸡子、罗汉柴、铁甲树、椰树等别名。主要分布于长江以南地带，如福建、江西、浙江、湖南、广西、广东等地。据报道，竹柏叶片和树皮可散发类似丁香的气味，具有驱蚊虫功效；在瑶族民间，竹柏作为习用中草药，具有止血、接骨、消肿作用；也可治外伤、出血、骨折、狐臭、眼疾、感冒等；竹柏鲜树皮或根的水煎剂可用于治风湿性关节炎([1]国家中医药管理局《中华本草》编委会，中华本草[M]，第2册第4卷，上海科学技术出版社，1999.0813-0817；[2]戴斌，中国现代瑶药[M]，广西科学技术出版社，2009:257-259.16-18])。文献也报道了竹柏果皮和果壳中挥发油成分具有抗肿瘤活性(廖泽勇，韦玮，竹柏果皮和果壳中挥发油成分及其抗肿瘤活性研究[J].医药导报，2015,34(5):609-612)。

为了深入研究该民族中药，我们对生长在福建省的竹柏叶进行了提取分离。以期从中发现新的候选药物或先导药物。

发明内容

本发明的目的是针对临床上应用的抗肿瘤/癌症药物具有毒、副作用大的现状，提供了从瑶族习用药材竹柏叶中分离获得的新甾体类化合物(A和B)及该化合物在治疗肿瘤/癌症方面的用途。

本发明提供了一种A和B所示的甾体化合物：

本发明还提供所述A和B化合物的提取分离方法，包括以下步骤：

(1)将竹柏叶粉碎，用酒精水溶液浸泡，过滤浓缩得到浸膏；

(2)将步骤(1)所得的浸膏用水分散，依次分别用石油醚、乙酸乙酯、氯仿、正丁醇萃取3-5次，将不同极性的萃取液分别浓缩即得不同极性的浸膏；

(3)将步骤(2)中所得的乙酸乙酯浸膏进行硅胶柱分离，采用展开剂进行梯度洗脱，得到了不同极性的组分；

(4)通过HPLC分析不同极性的组分，再通过柱分离、重结晶，得到所述甾体类化合物A和B。

根据本发明的实施方案，所述步骤(1)中，酒精水溶液中酒精的质量分数可以为50-80％，例如50％，60％，70％，80％；浸泡温度为15-30摄氏度，优选为室温；浸泡时间为20-40天，优选为25-35天，例如为28天，29天，30天，31天，32天；

根据本发明的实施方案，所述步骤(2)中，所述浸膏与水的质量体积比(g/mL)为(0.2-3):1，例如(0.5-2):1，示例性为1:1；