[发明专利]一种改进的曲普瑞林的固相合成方法

权利要求书

1.一种改进的曲普瑞林的固相合成方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)以酰胺树脂为固相载体，以Fmoc保护氨基酸为单体，末端为Boc保护的Pyr，以哌嗪为脱帽试剂，在缩合剂的作用下，依次逐个接上氨基酸，合成曲普瑞林Pglu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH₂；

2)用切肽试剂切肽后浓缩，得到曲普瑞林粗品。

2.根据权利要求1所述的一种改进的曲普瑞林的固相合成方法，其特征在于：步骤1)中，保护氨基酸单体为：

Boc-Pyr-OH，Fmoc-His(Boc)-OH，Fmoc-Trp(Boc)-OH，Fmoc-Ser(But)-OH，Fmoc-Tyr(But)-OH，Fmoc-D-Trp(Boc)-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Arg(pbf)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Gly-OH。

3.根据权利要求1所述的一种改进的曲普瑞林的固相合成方法，其特征在于：步骤1)中，所述的脱帽试剂哌嗪溶液的溶剂为偶极非质子溶剂，哌嗪的质量浓度为2％-5％。

4.根据权利要求1所述的一种改进的曲普瑞林的固相合成方法，其特征在于：步骤1)中，所述的缩合剂为：HBTU、HATU、TATU、TBTU、PyBOP、BOP、DIC、DCC其中的一种。

5.根据权利要求1所述的一种改进的曲普瑞林的固相合成方法，其特征在于：步骤2)中，所述的切肽试剂为：三氟乙酸溶液。

6.根据权利要求1所述的一种改进的曲普瑞林的固相合成方法，其特征在于：步骤2)中，所述的曲普瑞林粗品的纯度可以达到90％。

7.根据权利要求1～6任一项所述的一种改进的曲普瑞林的固相合成方法，其特征在于：步骤1)中合成步骤如下：

1.Gly-树脂的合成；

2.Pro-Gly-树脂的合成；

3.Arg(pbf)-Pro-Gly-树脂的合成；

4.Leu-Arg(pbf)-Pro-Gly-树脂的合成；

5.D-Trp(Boc)-Leu-Arg(pbf)-Pro-Gly-树脂的合成；

6.Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Leu-Arg(pbf)-Pro-Gly-树脂的合成；

7.Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Leu-Arg(pbf)-Pro-Gly-树脂的合成；

8.Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Leu-Arg(pbf)-Pro-Gly-树脂的合成；

9.His(Boc)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Leu-Arg(pbf)-Pro-Gly-树脂的合成；

10.Boc-Pyr-His(Boc)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Leu-Arg(pbf)-Pro-Gly-树脂的合成。

8.根据权利要求1～6任一项所述的一种改进的曲普瑞林的固相合成方法，其特征在于：步骤2)中合成步骤如下：

1、将树脂肽用甲醇洗涤4遍，真空干燥24小时；

2、配置三氟乙酸裂解液(TFA:H₂O:TIS＝95:2.5:2.5)，取300ml裂解液倒入反应器中反应30min，收集反应液，重复反应四遍；

3、收集所有裂解液，浓缩，浓缩至少量时，加500ml冷乙醚沉淀；

4、收集沉淀，用乙酸乙酯将沉淀洗涤3遍，过滤收集沉淀，真空干燥后得到曲普瑞林的粗品。