[发明专利]靶向M细胞的GEM颗粒表面展示系统、颗粒疫苗及制备方法与应用

权利要求书

1.一种靶向黏膜M细胞的GEM颗粒表面展示系统，其特征在于，所述GEM颗粒表面展示系统包括核心组件SAM^E，所述核心组件SAM^E包括His标签、N-乙酰胞壁质酶C末端肽聚糖结合区cA、多克隆位点MCS和M细胞杂合肽Mtp构成；核心组件SAM^E的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；编码所述核心组件SAM^E的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.如权利要求1所述的靶向黏膜M细胞的GEM颗粒表面展示系统在制备GEM颗粒疫苗的应用。

3.幽门螺旋杆菌GEM颗粒疫苗GEM-SAM^E-WAE，其特征在于，所述幽门螺旋杆菌GEM颗粒疫苗GEM-SAM^E-WAE包括在GEM颗粒表面展示的重组抗原SAM^E-WAE；所述重组抗原SAM^E-WAE含有核心组件SAM^E和幽门螺旋杆菌多表位肽WAE；核心组件SAM^E的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；编码所述核心组件SAM^E的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述幽门螺旋杆菌多表位肽WAE的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；编码所述幽门螺旋杆菌多表位肽WAE的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；重组抗原SAM^E-WAE的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述重组抗原SAM^E-WAE的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

4.如权利要求3所述的幽门螺旋杆菌GEM颗粒疫苗GEM-SAM^E-WAE在制备防治幽门螺旋杆菌感染相关性胃病的药物的用途。

5.如权利要求3所述的幽门螺旋杆菌GEM颗粒疫苗GEM-SAM^E-WAE的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

合成如序列SEQ ID NO.2所示的SAM^E片段，将所述SAM^E片段通过酶切和连接，克隆到pCzn1载体上，得到peSAM^E重组载体；

合成如序列SEQ ID NO.4所示的WAE片段，双酶切所述WAE片段和所述peSAM^E重组载体；回收得到peSAM^E重组载体线性化片段，与所述WAE片段连接得到peSAM^E-WAE重组载体；

将所述peSAM^E-WAE重组载体转化进表达宿主细胞，通过培养和诱导剂诱导表达，纯化得到重组抗原SAM^E-WAE；

通过三氯乙酸制备乳酸菌的GEM颗粒，将制备的所述GEM颗粒和所述重组抗原SAM^E-WAE混合重悬，得到GEM颗粒疫苗GEM-SAM^E-WAE。

6. 根据权利要求5所述幽门螺旋杆菌GEM颗粒疫苗GEM-SAM^E-WAE的制备方法，其特征在于，所述SAM^E片段和所述pCzn1载体选择的双酶切位点为Nde I/Hind III，所述WAE片段和所述peSAM^E重组载体选择的双酶切位点为KpnⅠ和XbaⅠ。

7.根据权利要求5所述幽门螺旋杆菌GEM颗粒疫苗GEM-SAM^E-WAE的制备方法，其特征在于，所述表达宿主细胞为大肠杆菌。

8. 根据权利要求7所述幽门螺旋杆菌GEM颗粒疫苗GEM-SAM^E-WAE的制备方法，其特征在于，所述大肠杆菌选自ArcticExpress (DE3)，DH5α，TOP10，BL21(DE3)，BL21(DE3)pLysS或Rosetta。