[发明专利]幽门螺旋杆菌四价毒力因子GEM颗粒疫苗及制备方法与应用

权利要求书

1.一种幽门螺旋杆菌四价毒力因子GEM颗粒疫苗，其特征在于，所述GEM颗粒疫苗包括在GEM颗粒表面展示重组抗原SAM^E-FVpE；重组抗原SAM^E-FVpE含有核心组件SAM^E和幽门螺旋杆菌毒力因子多表位肽FVpE。

2.根据权利要求1所述的幽门螺旋杆菌四价毒力因子GEM颗粒疫苗，其特征在于，所述毒力因子多表位肽FVpE的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；编码所述毒力因子多表位肽FVpE的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.根据权利要求1所述的幽门螺旋杆菌四价毒力因子GEM颗粒疫苗，其特征在于，所述核心组件SAM^E的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，编码所述核心组件SAM^E的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

4.根据权利要求1所述的幽门螺旋杆菌四价毒力因子GEM颗粒疫苗，其特征在于，重组抗原SAM^E-FVpE的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示；重组抗原SAM^E-FVpE的核苷酸序列如SEQID NO.6所示。

5.如权利要求1-4任一项所述幽门螺旋杆菌四价毒力因子GEM颗粒疫苗在制备防治幽门螺旋杆菌感染相关性胃病的药物中的应用。

6.一种幽门螺旋杆菌四价毒力因子GEM颗粒疫苗的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

合成如序列SEQ ID NO.4所示的SAM^E基因片段，将所述SAM^E基因片段通过酶切和连接，克隆到pCzn1载体上，得到peSAM^E重组载体；

通过扩增得到如序列SEQ ID NO.2所示的毒力因子多表位肽FVpE基因片段，将FVpE基因片段与经双酶切的peSAM^E重组载体混合，通过一步法无缝克隆技术将FVpE片段克隆进peSAM^E重组载体，得到peSAM^E-FVpE重组载体；

将所述peSAM-FVpE重组载体转化进宿主细胞，通过培养和诱导剂诱导表达，纯化得到重组抗原SAM^E-FVpE；

通过三氯乙酸制备乳酸菌的GEM颗粒，将制备的所述GEM颗粒和所述重组抗原SAM^E-FVpE混合重悬，得到GEM颗粒疫苗GEM-SAM^E-FVpE。

7.根据权利要求6所述幽门螺旋杆菌四价毒力因子GEM颗粒疫苗的制备方法，其特征在于，所述诱导剂为IPTG，所述诱导剂的工作浓度为0.5mmol/L。

8.根据权利要求6所述幽门螺旋杆菌四价毒力因子GEM颗粒疫苗的制备方法，其特征在于，所述表达宿主细胞为大肠杆菌；

优选地，所述大肠杆菌选自ArcticExpress (DE3)，DH5α，TOP10，BL21(DE3)，BL21(DE3)pLysS或Rosetta；

优选地，所述大肠杆菌为ArcticExpress (DE3)。

9.根据权利要求8所述幽门螺旋杆菌四价毒力因子GEM颗粒疫苗的制备方法，其特征在于，纯化重组蛋白包括层析和透析；所述柱层析选用Ni-IDA-Sepharose CL-6B亲和层析柱；所述透析的透析液为20 mM Tris-HCl，0.10 M NaCl，pH8.0的透析液。

10.根据权利要求9所述幽门螺旋杆菌四价毒力因子GEM颗粒疫苗的制备方法，其特征在于，所述层析缓冲液的流速为0.5-1mL/min，所述透析的透析液为20 mmol/L Tris-HCl，0.10 mol/L NaCl，pH8.0的溶液。