[发明专利]M细胞靶向性重组乳酸菌疫苗及制备方法与应用

说明书

本申请提供了M细胞靶向性重组乳酸菌疫苗及制备方法与应用，属于生物医学及生物工程领域。本申请提供的M细胞靶向性重组乳酸菌疫苗，主要将幽门螺旋杆菌多表位肽WAE连接进靶向M细胞的重组乳酸菌表面展示系统，转化进乳酸菌，制备出可防治幽门螺旋杆菌感染的重组乳酸菌疫苗。重组乳酸菌疫苗可表达含有核心组件SAM和多表位肽WAE的重组抗原SAM‑WAE，核心组件SAM可将重组抗原SAM‑WAE展示在乳酸菌表面，且将其靶向投递给胃肠道的M细胞，实现精准免疫，提高免疫效率，诱导胃肠道产生针对幽门螺旋杆菌的特异性黏膜免疫应答，起到防治幽门螺旋杆菌感染相关性胃病的目的。

技术领域

本申请涉及生物医学及生物工程领域，具体而言，涉及M细胞靶向性重组乳酸菌疫苗及制备方法与应用。

背景技术

幽门螺旋杆菌（Hp）是胃炎、胃溃疡和胃癌的重要致病因子，世界感染率超过50%，我国Hp感染率高达58.07%，且呈现明显的家庭聚集性，形式更加严峻。目前，临床治疗Hp感染性胃病的方法主要是多联抗生素疗法，但是面临着抗生物导致Hp耐药性、治疗后再感染、抗生素破坏肠道微生态平衡、药物毒副作用和病人依从性差等问题，难以在Hp感染人群中大规模推广使用，研发有效的Hp疫苗具有很好的应用前景。Hp对人类胃部的感染，关键的第一步是通过黏附因子黏附胃黏膜细胞。幽门螺旋杆菌关键毒力和黏附因子主要有尿素酶、黏附素HpaA、热休克蛋白HSP60、中性粒细胞激活蛋白NAP等。Hp多价表位疫苗CWAE主要含有来自Hp关键黏附和毒力因子（尿素酶、HpaA和HSP60）的优势抗原表位或区段、中性粒细胞激活蛋白NAP和霍乱毒素B亚基（CTB），研究已证实Hp多价表位疫苗CWAE具有很好的防治Hp感染的免疫效果。

口服类疫苗的免疫原性一般较弱，需使用大量抗原多次接种，且免疫应答持续时间较短，容易产生免疫耐受。微皱褶细胞（M细胞）是胃肠道黏膜免疫系统中一种特化的抗原转运细胞，散布于黏膜上皮细胞间，能将抗原从胃肠腔内转运到上皮下的淋巴组织，诱导黏膜免疫反应。M细胞是胃肠道黏膜免疫系统的“入口”，其对抗原的摄取是启动胃肠黏膜免疫应答关键的第一步。因此，“抗原能否被M细胞大量摄取”是口服类疫苗免疫成败的关键所在。利用“与M细胞表面受体相结合的M细胞靶向肽”，将抗原靶向递呈给M细胞，增加其对抗原的摄取和转运效率，激发高水平黏膜免疫应答，是一种提高口服类疫苗免疫效果的有效策略。

口服类疫苗在激发胃肠道黏膜免疫应答和特异性细胞免疫应答具有一定优势，但是直接口服给药，疫苗效果往往甚微，其中主要原因是：胃肠道中存在大量的酸和蛋白水解酶，会破坏疫苗抗原。因此，研究安全有效的黏膜免疫投递系统是口服类疫苗研究领域的一个热点。乳酸菌是一群在人体肠道内的常见益生细菌，作为口服类疫苗的黏膜免疫投递系统，具安全性高等独特优势。另外，将抗原展示在乳酸菌表面更符合黏膜疫苗的要求。锚定蛋白是细菌表面展示技术中的核心组件。N-乙酰胞壁质酶（AcmA）是在乳酸菌表面展示系统中常用的一种锚定蛋白。然而，在胞内表达的AcmA往往跨膜转运活性不强。基于AcmA设计更为有效的乳酸菌细胞表面展示系统，仍是一项亟待研究的工作。

发明内容

本申请的第一方面，公开了M细胞靶向性重组乳酸菌疫苗， M细胞靶向性重组乳酸菌疫苗包括能将幽门螺旋杆菌多表位肽WAE展示到表面的、靶向黏膜M细胞的重组乳酸菌，幽门螺旋杆菌多表位肽WAE的氨基酸序列如SEQ ID NO.1 所示。

重组乳酸菌表面展示系统主要是将乳酸菌作为一种工程菌，分泌表达疫苗抗原；疫苗抗原通过与其偶联的锚定蛋白，展示在乳酸菌表面，称之为重组乳酸菌疫苗。大量实验研究报道，多种病原体抗原已成功在乳酸菌中分泌表达并展示在乳酸菌表面，经胃肠道黏膜途径免疫可激发特异性黏膜免疫应答。

在实施例中，M细胞靶向性重组乳酸菌疫苗可表达出含有核心组件和幽门螺旋杆菌多表位肽WAE的重组抗原，核心组件可将重组抗原靶向投递给胃肠道的M细胞，可刺激M细胞产生针对幽门螺旋杆菌的特异性免疫应答，达到防治幽门螺旋杆菌感染相关性胃病的目的。