[发明专利]一种基于磁棒法的自主吸液式核酸检测卡盒及使用方法

权利要求书

1.一种基于磁棒法的自主吸液式核酸检测卡盒及使用方法，其特征在于：包括一体式盒体和推进阀两部分；所述一体式盒体包括8个从右至左线性排列的竖直管状结构，其中，1~6号管为上方下圆结构，1~5号管的尺寸相同，6号管比1-5号管短，6号管底部高于1~5号管；7号管为方形结构；8号管是扩增反应管；所述推进阀安设在7管中。

2.根据权利要求1所述的一种基于磁棒法的自主吸液式核酸检测卡盒及使用方法，其特征在于，所述8号管为带盖的封闭管状结构，上部为圆柱形，下部为圆锥形。

3.根据权利要求1所述的一种基于磁棒法的自主吸液式核酸检测卡盒及使用方法，其特征在于，所述1~6号管，管内预封装磁珠法核酸提取所需的液体试剂，管口设置凸起的棱，并在棱上通过超声波、加热等方法封膜密封。

4.根据权利要求1所述的一种基于磁棒法的自主吸液式核酸检测卡盒及使用方法，其特征在于，所述7号管在与6号管相邻侧壁靠近6号管底部位置设置一个圆形开孔，连通6号管和7号管，在7号管与8号管相邻侧壁靠近8号管管口位置设置一个圆形开孔，连通7号管和8号管，7号管底部开设一个圆形通气小孔。

5.根据权利要求1所述的一种基于磁棒法的自主吸液式核酸检测卡盒及使用方法，其特征在于，所述8号管中预封装扩增检测所需固体冻干试剂。

6.根据权利要求1所述的一种基于磁棒法的自主吸液式核酸检测卡盒及使用方法，其特征在于，所述推进阀为截面呈正方形的长条形结构，推进阀的阀体上开设两个从右至左斜向下贯穿阀体截面中心相互平行的圆形上通道和下通道；推进阀在外部装置推动下向下运动。

7.根据权利要求1和6任一所述的一种基于磁棒法的自主吸液式核酸检测卡盒及使用方法，其特征在于，当推进阀推进到某两个设定深度时，上通道和下通道分别连通权利要求3所述的7号管左右侧壁两个开孔。

8.根据权利要求1所述的一种基于磁棒法的自主吸液式核酸检测卡盒及使用方法，其特征在于，所述1号管和6号管底部设置加热控制装置。

9.根据权利要求1所述的一种基于磁棒法的自主吸液式核酸检测卡盒及使用方法，其特征在于，所述扩增反应管的顶盖上方设置加热装置，扩增反应管的底部设置升降温循环控制装置；所述扩增反应管侧面设置荧光激发检测装置。

10.根据权利要求1所述的一种基于磁棒法的自主吸液式核酸检测卡盒及使用方法，其特征在于，核酸检测卡盒使用方法的步骤如下：

（a）卡盒装配过程：首先将固体冻干试剂加入扩增反应管中，关盖；然后安装推进阀，使上通道对准7号管左右侧壁开孔，使6号管和扩增反应管连通，从6号管抽气，使扩增反应管内部达到真空状态，下压推进阀关闭通道，此时8号管中保持真空状态；然后，将核酸提取所需液体试剂依次装入1~6号管中，并在管口通过超声波、加热等方式封膜密封；

（b）核酸检测过程：将装配好的一体式盒体撕去封膜，在1号管内加入待测样本，装入配套的检测设备中，检测设备中已装备检测所需的磁棒、磁棒套、温控和荧光检测装置；

首先进行磁棒法核酸提取操作：

1）裂解结合，外部仪器驱动磁棒和磁棒套同时进入2号管102中，将磁珠吸附在磁棒套上，然后驱动磁棒和磁棒套进入1号管101，撤去磁棒，吸附的磁珠从磁棒套上脱落进入1号管101的液体中，驱动磁棒套上下震动混匀液体，同时1号管101底部加热装置开启，促进裂解和结合；

2）洗涤，驱动磁棒和磁棒套同时进入1号管101，将磁珠吸附在磁棒套上，然后驱动磁棒和磁棒套进入3号管103，撤去磁棒，驱动磁棒套上下震动混匀清洗磁珠，清洗磁珠表面杂质，然后用同样的方法将磁珠转移至4号管104，进行第二次清洗操作；

3）除醇，驱动磁棒和磁棒套将磁珠转移至5号管105，撤去磁棒，驱动磁棒套上下震动，混匀液体，除去磁珠表面残留的洗涤剂；

4）洗脱，驱动磁棒和磁棒套将磁珠转移至6号管106中，撤去磁棒，驱动磁棒套上下震动，混匀液体，同时开启6号管106底部加热装置，促进洗脱，完成洗脱后，用同样的方法将磁珠转移至5号管105丢弃，核酸提取过程完成，纯化的核酸样本位于6号管液体中；

然后进行转液及扩增检测步骤：

1）转液，外部装置下压推进阀2，使下通道203对齐7号管107左右侧面开孔，6号管106中的液体在大气压的作用下压入扩增反应管108中，并溶化预封装在扩增反应管108内部的固体冻干试剂；

2）扩增检测，采用实时荧光PCR扩增检测，首先开启8号管108顶盖加热装置，使顶盖温度上升至99℃左右，然后，开启8号管108底部升降温热循环控制装置，进行PCR热循环控制，并在每个循环结束前进行荧光信号激发与采集，最终获得实时荧光曲线，通过分析荧光曲线获得检测结果。