[发明专利]一种基于LFD-RMA技术检测新型冠状病毒的试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种基于LFD-RMA技术检测新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括上游引物、下游引物和探针，

上游引物序列ORF1ab-F为：

5’-TACATTGGCGACCCTGCTCAATTACCTGCACCAC-3’；

下游引物序列ORF1ab-R为：

5’-[Biotin]AATTTCAGCAGGACAACGCCGACAAGTTCCGAGG-3’；

探针序列ORF1ab-P为：

5’-[FAM]CATTGCTAACTAAGGGCACACTAGAACCAGAAT[dSpacer]ATTTCAATTCAGTGT[C3-spacer]-3’。

2.如权利要求1所述的一种基于LFD-RMA技术检测新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：阳性标准品、阴性标准品、酶混合物、侧流层析检测试纸条、醋酸镁、缓冲液和产物稀释液。

3.如权利要求2所述的一种基于LFD-RMA技术检测新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，所述阳性标准品为新型冠状病毒的ORF1ab基因片段与pMD18-T载体相连接后得到的重组质粒；所述阴性标准品为无菌双蒸水。

4.如权利要求3所述的一种基于LFD-RMA技术检测新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，所述酶混合物包括大肠杆菌RecA蛋白、单链结合蛋白GP32、噬菌体UvsY蛋白、Bst聚合酶和核酸外切酶III。

5.如权利要求4所述的一种基于LFD-RMA技术检测新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的RMA扩增反应试剂的配比如下：

试剂	终浓度
Tris	50mM
醋酸镁	100mM
聚环氧乙烷	10％(w/v)
海藻糖	2mM
甘露醇	2.5mM
ATP	10mM
dNTPs	2mM
肌酸激酶	1000ng/mL
磷酸肌酸	25mM
引物	10μM
探针	10μM
大肠杆菌RecA蛋白	100ng/μL
UvsY蛋白	40ng/μL
单链结合蛋白GP32	800ng/μL
Bst聚合酶	60ng/μL
核酸外切酶III	80ng/μL

各试剂的终浓度如表。