[发明专利]CpG寡脱氧核苷酸、包含其的免疫组合物及制备组合物并通过其刺激免疫反应的方法

说明书

在这里公开一种CpG寡脱氧核苷酸(CpG‑ODN)，其是作为开发用于在不同物种中使用作为佐剂的有效免疫刺激。TLR9为CpG‑ODN的细胞受体，且目前开发的CpG‑ODN对兔子的TLR9具有低活性。本文中，包含约11‑14个脱氧核苷酸的GACGTT或AACGTT基序的CpG‑ODN类型展现出对兔子的TLR9具有有效的免疫刺激活性，且能够在兔子中提升较少毒性且有效的抗体反应。

本申请是申请号为201480041044.7(PCT申请号为PCT/US2014/047271)、申请日为2014年07月18日、发明名称为“CpG寡脱氧核苷酸、包含其的免疫组合物及组合物用于制备治疗以刺激免疫反应的药物的应用”的发明专利申请的分案申请。

技术领域

相关申请的交互参照

本申请主张于2013年7月19日申请的美国临时申请No.61/856268的效益，其公开在这里完全并入以作为参考。

本发明一般关于CpG寡脱氧核苷酸、包括CpG寡脱氧核苷酸的免疫组合物、用于制备免疫组合物的方法以及用于刺激免疫反应的方法，特别是包括GACGTT或 AACGTT基序的CpG寡脱氧核苷酸、包括CpG寡脱氧核苷酸的免疫组合物、用于制备免疫组合物的方法以及用于刺激TLR9活化免疫反应的方法。

背景技术

CpG寡脱氧核苷酸(CpG-ODN)是有效的免疫刺激，且类铎受体9(TLR9)为其细胞受体(1-5)。由于CpG-ODN的TLR9活化而可能导致若干免疫作用，包含增加T辅助 (Th)1极化细胞激素生成、调升主要组织兼容性复体(MHC)共同刺激分子，以及活化及增加B细胞增生以增加抗体生成。因为这些有效的免疫刺激作用，因此CpG-ODNs 在人类的过敏、癌症及传染病免疫治疗的广泛应用范围内被研究，以作为不同物种的佐剂(adjuvant)(6-11)。

一般而言，CpG-ODN包含18-24个硫代磷酸酯脱氧核苷酸(phosphorothioateddeoxynucleotides)的长度，具包含六聚体基序(CpG基序)的一或多份(copies)CpG脱氧核苷酸，且其免疫刺激活性是根据CpG基序的数目，以及CpG基序的位置、间距及周边碱基而定。CpG-ODN的免疫刺激活性在不同物种中可能相异。目前所知为该物种相异性是通过CpG-ODN中的CpG基序的核苷酸内容(context)来决定。例如，含 GTCGTT基序的CpG-ODN相比具有GACGTT基序的，会在人体及不同家畜中产生较高的免疫反应；相反地，后者在鼠类细胞(3,4)中活化较为有效。CpG-ODN物种相异活性是由于不同物种(12,13)的TLR9活化的不同程度。

现有研究显示，相比人类(h)TLR9及小鼠(m)TLR9，兔子(rab)TLR9对于具有GTCGTT基序或GACGTT基序的CpG-ODN具有更广的配体识别模式(ligand recognitionprofile)；然而，目前开发用于活化人类或小鼠细胞的CpG-ODN对rabTLR9 (14)具有低活性。这些结果与由Rankin等人报告的观察相符。其中观察显示具有 GTCGTT或GACGTT基序的CpG-ODN在活化兔子细胞(15)上并无偏好性。因此，开发对rabTLR9具有高活性以产生兔子抗体反应的CpG-ODN而作为TLR9活化佐剂，进而增加兔子的抗体生成为不可或缺的。

参考文献

下列参考文献的公开是通过引用而完全并入本文。

1.Krieg AM、Yi AK、Matson S、Waldschmidt TJ、Bishop GA、Teasdale R、Koretzky GA及Klinman DM(1995年)。《细菌DNA的CpG基序引发直接B细胞活化》(CpGmotifs in bacterial DNA trigger direct B-cell activation)。自然期刊(Nature)，卷374：页次546-549。