[发明专利]一种鸡传染性法氏囊病病毒多抗原表位蛋白及其应用有效

专利信息
申请号: 202011099954.4 申请日: 2020-10-15
公开(公告)号: CN112159480B 公开(公告)日: 2022-03-22
发明(设计)人: 吴异健;陈强;刘珍妮;李明慧;廖吕燕;李娜 申请(专利权)人: 福建农林大学
主分类号: C07K19/00 分类号: C07K19/00;C12N15/70;A61K39/12;A61P31/14;C12R1/19
代理公司: 福州元创专利商标代理有限公司 35100 代理人: 饶文君;蔡学俊
地址: 350002 福*** 国省代码: 福建;35
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摘要:
搜索关键词: 一种 传染性 法氏囊病 病毒 多抗 原表位 蛋白 及其 应用
【说明书】:

发明提供的是一种鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)多抗原表位蛋白及其应用,所述蛋白其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示,本申请将鸡免疫球蛋白IgG重链部分恒定区(γCH)作为多表位融合蛋白的载体蛋白,将IBDV代表性毒株VP2和VP3上的B细胞表位和T细胞表位基因进行串联合成后与γCH编码基因相连接,构建重组质粒pET‑VP2+3‑γCH,并转化至大肠杆菌BL21中进行表达。重组多抗原表位融合蛋白pVP2+3‑γCH经过纯化和鉴定后通过SPF鸡进行的免疫攻毒保护试验,初步显示出了良好的免疫保护效果。本研究成功构建和表达重组多抗原表位蛋白pVP2+3‑γCH,为IBDV多表位疫苗的研发奠定基础。

技术领域

本发明涉及一种鸡传染性法氏囊病病毒多抗原表位蛋白及其应用,属于生物技术领域。

背景技术

目前,临床上使用的畜禽病毒病疫苗主要是弱毒苗和灭活苗。弱毒苗在临床应用中可能会存在毒株返强以及疫苗株与野生型毒株基因重组等安全性问题。而灭活苗更倾向于诱导体液免疫,其诱导细胞免疫的能力相对较弱。一个理想的疫苗除应具有安全性之外,还应同时诱导机体的特异性体液免疫和细胞免疫。通过诱导体液免疫产生高亲和力中和抗体,阻止病毒与靶细胞受体的结合。而诱导细胞免疫则产生特异性细胞毒性T细胞(CTL),CTL识别靶细胞后能够直接裂解靶细胞或者诱导靶细胞的凋亡,从而抑制病毒在体内的复制。除了常规的灭活苗和弱毒苗,目前研究的较多的亚单位疫苗和DNA疫苗。这几种新型疫苗有较多优点,但也存在一些不足的地方。亚单位疫苗一般通过生物技术手段直接得到较纯的病毒主要中和抗原,免疫动物后能直接迅速诱导机体产生大量的中和抗体。亚单位疫苗存在的不足是以目前的技术手段想要得到很纯的亚单位蛋白成本相对比较高昂,而亚单位蛋白纯度不够临床免疫效果也受影响。有关DNA疫苗研究已有很多年,传统的DNA疫苗是将病原的主要抗原的基因克隆到真核表达质粒上,通过重组的真核质粒对动物进行免疫,免疫后外源的病毒蛋白可在动物体内表达,作为动物机体来说外源蛋白的表达将会刺激机体产生免疫应答,产生相应的抗体,从而保护机体。但是DNA疫苗还有许多不足,主要是真核表达质粒在动物机体表达外源蛋白不容易,即使表达有蛋白但是表达的蛋白能否引起机体免疫应答也是其中一个问题;同时大量提纯质粒成本还是比较高昂,不易实现大规模的应用。多表位疫苗是近年发展起来的一种基于目标抗原表位设计的新型疫苗,相对于传统弱毒疫苗,其安全性更高。将病毒蛋白上的多个B细胞或T细胞表位整合到特定载体上构建的多表位疫苗能够有效刺激机体产生针对多个表位的B细胞或T细胞克隆,从而有利于控制病毒的感染。多表位疫苗在抑制病毒复制和对抗免疫逃逸株等方面都具有独特优势,是目前疫苗研究的一个热点。

临床常用的IBD疫苗主要是灭活苗和弱毒苗,灭活苗主要是通过扩增病毒后经过灭活使病毒失去致病型但仍有免疫原性而能够诱发鸡产生相应的抗体;弱毒苗是通过不断的传代使病毒逐渐失去原有的毒力以及高致病性,能导致鸡发生免疫反应而提高抗体水平又不会使鸡严重感染和发病。这两种疫苗临床效果一直都比较良好,基本可以控制预防IBD的发生,IBD的爆发因此而相对被控制。不过值得注意的是虽然常规疫苗可以一定程度上抑制疾病的发生,但是现在有一些关于免疫失败的报道,接种过IBDV疫苗的鸡场因免疫失败而爆发此病。这其中导致免疫失败的原因很多,而病毒本身与疫苗株差异直接导致了免疫接种产生的抗体无法抵抗病毒的攻击是免疫失败的主要原因。IBDV容易发生变异,许多免疫失败的报道表明对新型疫苗的研究刻不容缓。本发明构建表达了以鸡免疫球蛋白IgG重链部分恒定区为载体蛋白的包含IBDV代表性毒株VP2和VP3上的B细胞表位和T细胞表位的重组多抗原表位融合蛋白pVP2+3-γCH,该蛋白免疫保护效果,为 IBDV多表位疫苗的研发奠定基础。

发明内容

本发明的目的在于提供一种鸡传染性法氏囊病病毒多抗原表位蛋白及其应用,提供鸡传染性法氏囊病病毒多抗原表位蛋白的制备方法,以及通过研究比较本发明制备的蛋白与两种IBDV商品疫苗对鸡的免疫效果,为IBDV疫苗的研制和该病的防治提供帮助。

为实现上述目的,本发明采用如下技术方案:

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