[发明专利]用于检测非洲猪瘟病毒野毒株和基因缺失株的引物组、试剂盒、方法和应用

权利要求书

1.一种用于检测非洲猪瘟病毒野毒株和基因缺失株的引物组，其特征在于，包括用于检测VP72基因的引物、用于检测MGF360-14L基因的引物和用于检测CD2V基因的引物：

所述用于检测VP72基因的引物具有如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，或与SEQ ID NO.1和/或SEQ ID NO.2具有至少85％同一性的核苷酸序列；

所述用于检测MGF360-14L基因的引物具有如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列，或与SEQ ID NO.4和/或SEQ ID NO.5具有至少85％同一性的核苷酸序列；

所述用于检测CD2V基因的引物具有如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的核苷酸序列，或与SEQ ID NO.7和/或SEQ ID NO.8具有至少85％同一性的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述引物组还包括用于检测VP72基因的探针、用于检测MGF360-14L基因的探针和用于检测CD2V基因的探针；

所述用于检测VP72基因的探针具有如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列，或与SEQ IDNO.3具有至少85％同一性的核苷酸序列；

所述用于检测MGF360-14L基因的探针具有如SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列，或与SEQID NO.6具有至少85％同一性的核苷酸序列；

所述用于检测CD2V基因的探针具有如SEQ ID NO.9所示的核苷酸序列，或与SEQ IDNO.9具有至少85％同一性的核苷酸序列。

3.根据权利要求2所述的引物组，其特征在于，用于检测VP72基因的探针、用于检测MGF360-14L基因的探针和用于检测CD2V基因的探针的两端均独立地分别含有荧光淬灭基团和互不相同的荧光报告基团；

优选地，所述荧光报告基团包括FAM、HEX或ROX；用于检测VP72基因的探针优选含有FAM，用于检测MGF360-14L基因的探针优选含有HEX，用于检测CD2V基因的探针优选含有ROX；

优选地，所述荧光淬灭基团包括BHQ1或BHQ2。

4.一种用于检测非洲猪瘟病毒野毒株和基因缺失株的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-3任一项所述的引物组。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性对照品和/或阴性对照品。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照品包括含有部分或全部VP72基因的质粒、含有部分或全部MGF360-14L基因的质粒和含有部分或全部CD2V基因的质粒；

优选地，所述阴性对照品包括用于稀释阳性对照品的溶液，优选为TE溶液。

7.一种用于检测非洲猪瘟病毒野毒株和基因缺失株的方法，其特征在于，以待测样本的基因组DNA为模板，使用权利要求1-3任一项所述的引物组或权利要求4-6任一项所述的试剂盒进行PCR反应，根据扩增产物中含有的特异性片段或扩增曲线，判断待测样品是否含有非洲猪瘟病毒野毒株或基因缺失株：

若扩增产物中同时含有VP72基因、MGF360-14L基因及CD2V基因的特异性片段或扩增曲线，则待测样本中包含非洲猪瘟病毒野毒株；若扩增产物中同时不含有VP72基因、MGF360-14L基因及CD2V基因的特异性片段或扩增曲线，则待测样本中不包含非洲猪瘟病毒野毒株和基因缺失株；若扩增产物中含有VP72基因的特异性片段或扩增曲线，同时不含有MGF360-14L基因及CD2V基因的特异性片段或扩增曲线，则待测样本中含有MGF360-505R及CD2V双基因缺失株；若扩增产物中含有VP72基因和MGF360-14L基因的特异性片段或扩增曲线，同时不含有CD2V基因的特异性片段或扩增曲线，则待测样本中含有CD2V基因缺失株；若扩增产物中含有VP72基因和CD2V基因的特异性片段或扩增曲线，同时不含有MGF360-14L基因的特异性片段或扩增曲线，则待测样本中含有MGF360-505R单基因缺失株。