[发明专利]一种冬虫夏草的成分分析方法与应用

说明书

本发明公开了一种冬虫夏草的成分分析方法及应用，包括以下步骤：S1、待测样品制备：取冬虫夏草干品，将整个虫体进行包埋冷冻制片得到待测样品；S2、质谱分析：利用TOF‑SIMS对待测样品的化学成分进行全成分原位分析与成像。采用本发明方法，可实现冬虫夏草虫体中的氨基酸类、单糖类、核苷类、甾醇类、鞘脂类、磷脂类、甘油酯类、脂肪酸类、有机酸类、酚类等十几种主要类别化学成分的鉴定(可实现106个化合物的鉴定)。

技术领域

本发明涉及中药技术领域，具体涉及一种冬虫夏草的成分分析方法与应用。

背景技术

冬虫夏草为麦角菌科真菌冬虫夏草菌侵染蝙蝠蛾科昆虫幼虫而形成的幼虫尸体与真菌子座的干燥复合体。始载于公元8世纪的《月王药诊》，具有治疗肺部疾病的功效。冬虫夏草的主要化学成分包括氨基酸、核苷类、甾醇类、多糖类和甘露醇等。现代医学研究表明，冬虫夏草具有免疫调节、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤和保护肝肾等广泛的药理作用。随着人类对冬虫夏草野生资源的过度采挖，野生冬虫夏草资源越来越少，市场价格越来越高。

近些年，于室内以冬虫夏草菌感染蝙蝠蛾幼虫已成功地繁育了冬虫夏草，以满足冬虫夏草巨大的市场需求。在产品质量上，冬虫夏草繁育品是否完全等同于野生品？二者在化学成分上又有哪些异同？如何选择繁育品冬虫夏草的采收期？为了研究这些科学问题，中国学者已采用多种分析技术和方法对冬虫夏草繁育品和野生品的化学成分进行了分析和比较研究。然而，仍未取得理想的效果。基于此，开发一种能够实现冬虫夏草全成分分析的方法，对于冬虫夏草质量控制具有重要意义。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种冬虫夏草的成分分析方法，能够实现冬虫夏草的全成分分析，对实现冬虫夏草质量控制具有重要意义。

本发明还提出一种具有上述方法的应用。

根据本发明的第一方面实施方式的冬虫夏草的成分分析方法，包括以下步骤：

S1、待测样品制备：取冬虫夏草干品，将整个虫体进行包埋冷冻制片得到待测样品；

S2、质谱分析：利用二次离子飞行时间质谱仪(TOF-SIMS)对待测样品的化学成分进行全成分原位分析与成像。

根据本发明的一些实施方式，所述包埋冷冻制片处理包括包埋操作、冷冻处理操作和切片操作。

根据本发明的一些实施方式，所述包埋操作为双层包埋；优选地，所述双层包埋包括以下步骤：

S01、对冬虫夏草干品虫体软化处理后，将虫体完整浸入基质中，实现虫体表面基质包裹；

S02、待基质凝固后，浸入OCT冷冻包埋剂中并进行冷冻处理，即得。

根据本发明的一些实施方式，所述基质选自明胶溶液或羧甲基纤维素(CMC)溶液。

根据本发明的一些实施方式，所述明胶溶液中明胶的质量百分数为5～15％；优选为10％。

根据本发明的一些实施方式，所述羧甲基纤维素溶液中羧甲基纤维素的质量百分数为2％～5％；优选为4％。

根据本发明的一些实施方式，所述OCT冷冻包埋剂的用量以完全覆盖所述虫体为宜。

根据本发明的一些实施方式，所述冷冻处理为将浸入OCT冷冻包埋剂中的虫体置于容器中，再将容器置于冷冻剂中；优选地，所述冷冻剂选自液氮、异戊烷、戊烷或正己烷的至少一种。

根据本发明的一些实施方式，所述冷冻处理的时间为1～3min；优选为2min。

根据本发明的一些实施方式，所述切片操作具体为将包埋后的样品，置于-15～-25℃下平衡20～40min后，再在-15～-25℃下进行切片；优选地，平衡温度为-20℃，平衡时间为30min；切片温度-20℃。