[发明专利]一种基于多壁碳纳米管和金纳米颗粒信号放大的乳酸脱氢酶电化学检测方法

权利要求书

1.一种基于多壁碳纳米管和金纳米颗粒信号放大的乳酸脱氢酶电化学检测方法，其检测原理为：依次将多壁碳纳米管、金纳米颗粒及乳酸脱氢酶抗体修饰于玻碳电极表面，当乳酸脱氢酶出现时会与抗体结合，随后固定在电极表面的乳酸脱氢酶会催化底物溶液中的乳酸氧化生成丙酮酸，经差分脉冲伏安法测定电流强度得到乳酸脱氢酶浓度和电流强度之间的线性方程，通过计算即可实现乳酸脱氢酶的灵敏检测。

2.根据权利要求1所述的一种基于多壁碳纳米管和金纳米颗粒信号放大的乳酸脱氢酶电化学检测方法，其中玻碳电极的预处理步骤如下：依次用1000目、2000目和5000目砂纸对玻碳电极表面进行打磨，以1.0μm，0.3μm氧化铝悬浮液抛光玻碳电极成镜面，用双蒸水彻底冲洗；随后在95％乙醇和超净水中分别超声清洗5min后，将电极置于0.5M硫酸溶液中进行循环伏安扫描30个循环以去除电极表面的杂质，设置的扫描电位为-0.3V至+1.50V，以0.5V·s^-1的扫速进行扫描，直至获得稳定的循环伏安图，玻碳电极表面用蒸馏水冲洗并干燥。

3.根据权利要求1所述的一种基于多壁碳纳米管和金纳米颗粒信号放大的乳酸脱氢酶电化学检测方法，其中玻碳电极的多壁碳修饰步骤如下：称取10mg羧基化多壁碳纳米管，量取5mL去离子水，将多壁碳纳米管添加至去离子水中并超声分散30min，得到2mg/mL的多壁碳纳米管悬浮液，添加体积为5μL的多壁碳纳米管悬浮液至电极表面，在37℃温箱中干燥1h后用水洗去多余的多壁碳纳米管并吹干。

4.根据权利要求1所述的一种基于多壁碳纳米管和金纳米颗粒信号放大的乳酸脱氢酶电化学检测方法，其中玻碳电极的金纳米颗粒修饰步骤如下：将2mg/mL的氯金酸溶于0.5M的硫酸溶液中，将玻碳电极表面浸泡在氯金酸溶液中进行电化学沉积，电化学沉积施加电位为-200mV，时间为120s，洗净并吹干。

5.根据权利要求1所述的一种基于多壁碳纳米管和金纳米颗粒信号放大的乳酸脱氢酶电化学检测方法，其中玻碳电极的乳酸脱氢酶抗体修饰的步骤如下：将金纳米颗粒修饰的玻碳电极表面浸泡于体积为100μL浓度为0.41μg/mL的乳酸脱氢酶抗体溶液中进行抗体的修饰，修饰时间为12h，修饰温度为4℃，修饰后电极表面洗净并吹干。

6.根据权利要求1所述的一种基于多壁碳纳米管和金纳米颗粒信号放大的乳酸脱氢酶电化学检测方法，其中玻碳电极的表面封闭步骤如下：在抗体修饰的电极表面滴加5μL的0.1％牛血清蛋白溶液，以封闭电极表面的非特异性吸附位点，置于37℃温箱中孵育1h后冲洗并干燥备用。

7.根据权利要求1所述的一种基于多壁碳纳米管和金纳米颗粒信号放大的乳酸脱氢酶电化学检测方法，其中乳酸脱氢酶修饰的步骤如下：在封闭后的玻碳电极表面滴加5μL待检测溶液，在37℃温箱中孵育1h后，冲洗干净电极表面并吹干，在底物溶液中进行电化学检测。

8.根据权利要求1所述的一种基于多壁碳纳米管和金纳米颗粒信号放大的乳酸脱氢酶电化学检测方法，其中电化学检测的步骤如下：将进行权利要求7后所得的玻碳电极放入含0.8mM乳酸锂、0.3mM氧化型辅酶I磷酸缓冲盐溶液且pH值为6.5、体积为5mL的底物溶液中并用微分脉冲伏安法进行检测。磷酸缓冲盐溶液为1L溶液中含有8.5g氯化钠、2.2g磷酸氢二钠和0.2g磷酸二氢钠，电压范围为从-0.5V到+0.3V。