[发明专利]一种检测RNA中弱稳定性碱基对的固体核磁共振方法

权利要求书

1.一种检测RNA中弱稳定性碱基对的固体核磁共振方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)制备待测RNA样品，RNA样品中鸟嘌呤核糖核苷酸或尿嘧啶核糖核苷酸二者至少有一种由¹⁵N标记；

(2)对RNA样品进行水-RNA交换光谱的二维固体核磁脉冲序列2D WaterREXSY的设定，步骤包括：

首先将¹H信号激发，然后通过组合脉冲压制亚氨基的¹H信号，该组合脉冲包括¹H-¹⁵NREDOR或band selective-REDOR；

其次将¹H的磁化矢量方向偏转至魔角方向进行自旋锁场，其时间为t_SL，在锁场时，水和RNA中可交换质子发生化学交换；

再次通过Lee-Goldburg交叉极化将由水极化传递的亚氨基的¹H信号转移给化学键相连的¹⁵N原子，记录¹⁵N化学位移，同时利用脉冲对¹H去耦；

最后在¹H通道上利用MISSISIPPI脉冲序列进行溶剂信号的压制，再通过¹⁵N-¹H交叉极化将¹⁵N极化量转移给直接相连的¹H原子，记录¹H化学位移，完成化学交换过程的二维纪录；

(3)使用固体核磁共振波谱仪对RNA样品进行检测，得到二维WaterREXSY谱图；

(4)收集不同t_SL下二维WaterREXSY谱图并进行分析，得到RNA中亚氨基质子与水分子的化学交换速率。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，RNA样品的制备方法包括：通过体外转录法、固相合成方法或生物提取法。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，RNA样品通过含尿素的聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯化。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，RNA样品纯度在90％以上。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，对¹H去耦的脉冲包括TPPM、CW、XiX或SPINAL。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，得到RNA中亚氨基质子与水分子的化学交换速率的步骤包括：

对于2D WaterREXSY脉冲序列，在LG锁场时，通过调节t_SL改变水分子与RNA中可交换质子的交换时间；

在t_SL时间内，得到WaterREXSY谱图的信号强度与t_SL、交换速率常数k_ex之间的关系；

根据上述关系得到RNA中亚氨基质子与水分子的化学交换速率。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，根据Solomon方程推导得到WaterREXSY谱图的信号强度与t_SL、k_ex之间的关系。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述关系的方程如下：

S(t_SL)＝S(0)+A[1-exp(-k_ext_SL)]exp(-t_SL/T_1ρ)；

其中，S(0)为t＝0时的信号强度，A为常数，T_1ρ为参与交换的质子的自旋晶格弛豫时间，k_ex代表交换速率常数，t_SL为锁场时间，S(t_SL)代表不同t_SL下的信号强度。