[发明专利]一种微生物发酵产米尔贝霉素的方法

说明书

本发明公开了一种微生物发酵产米尔贝霉素的方法，包括以下步骤：S1菌种活化；S2扩大培养：将步骤S1得到的活化菌种，接种到扩大培养液中，进行扩大培养，得到增殖菌种；S3、发酵产生米尔贝霉素：将步骤S2得到的增殖菌种，接种到发酵培养液中，进行发酵培养，得到含米尔贝霉素的发酵液；所述的扩大培养液和发酵培养液中均含有诺丽果粉。本发明提高了细胞的活性，实现了米尔贝霉素的高效生产，同时缩短了发酵周期，有效避免了发酵过程中泡沫的产生，降低了生产成本。

技术领域

本发明涉及微生物发酵领域，具体来说，涉及一种微生物发酵产米尔贝霉素的方法。

背景技术

米尔贝霉素(Milbemycins)是由链霉菌产生的大环内酯类抗生素，包括一系列结构上非常类似的十六元环类组分。米尔贝霉素具有强烈的杀虫、杀螨、驱虫及抗肿瘤等生物学活性，大多数对农业害虫具有广谱防治活性，用于防治如蚜、螨、黄褐天幕毛虫、肠道寄生虫以及其他危害作物及家畜的寄生虫。米尔贝霉素具有作用强烈，用药量少，对人安全无毒，不污染环境，只杀害虫，不杀害虫天敌等特点。可作为防止该类药物产生抗性的复配及轮换用药，是目前最有前途的广谱高效新型无交叉抗性的生物杀虫剂。

虽然米尔贝霉素系列产品具有广泛的用途和市场，但由于只有日本拥有菌种资源，全球一直只有日本Sankyo公司生产milbemycin A3和A4原药。我国东北农业大学向文胜等也分离到了产米尔贝霉素的菌株，冰城链霉菌(Streptomyces bingchenggensis)，经过菌株诱变育种改良和发酵工艺优化，米尔贝霉素的产量可达1380μg/mL。

CN105087711A公开了一种链霉菌发酵生产米尔贝霉素用发酵培养基及发酵培养方法，发酵培养基组成为：蔗糖11.5-12.5％，棉籽饼粉0.8-1.2％，黄豆饼粉0.8-1.2％，脱脂奶粉0.8-1.2％，麦芽糖1.8-2.2％，磷酸氢二钾0.1-0.15％，硫酸亚铁0.01-0.015％，沸石粉0.38-0.42％，钼酸钠0.004-0.006％，硫酸铜0.004-0.006％，碳酸钙0.28-0.32％，消沫剂GPE0.03-0.05％，水余量。该发明通过培养基的改良将米尔贝霉素的产量提高到了2293-2330μg/mL。

CN106119314A公开了一种冰城链霉菌发酵生产米尔贝霉素的培养基和培养方法，通过优化冰城链霉菌发酵生产米尔贝霉素的种子培养基、发酵培养基中碳源、氮源和最佳配伍比例，并在发酵培养基中添加了发酵豆腐渣，保证了米尔贝霉素的技术效果，同时通过发酵过程中变温、搅拌、pH值、空气流量等参数的控制，使发酵生产米尔贝霉素的发酵单位达到1.5g/L以上。

综上所述，目前我国对米尔贝霉素发酵工艺的研究大多为优化发酵培养基、控制不同阶段的发酵温度、溶解氧等工艺参数等，虽然取得了一定进步，但传统的调整发酵培养基的氮源和碳源对米尔贝霉素产量的影响较小，没有实质性突破，同时存在，发酵周期长，发酵过程中容易产生泡沫等问题，造成生产成本过高，不能满足工业化生产的需求，因此，亟需一种有效的方法来提高米尔贝霉素发酵的产量。

发明内容

为了解决以上技术问题，本发明提供了一种微生物发酵产米尔贝霉素的方法，提高了细胞的活性，实现了米尔贝霉素的高效生产，同时缩短了发酵周期，有效避免了发酵过程中泡沫的产生，降低了生产成本。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种微生物发酵产米尔贝霉素的方法，包括以下步骤：

S1、菌种活化：

将菌种接种于种子培养液中进行活化培养，得到活化菌种；

S2、扩大培养：

将步骤S1得到的活化菌种，接种到扩大培养液中，进行扩大培养，得到增殖菌种；