[发明专利]黄芩三种成分协同增强FGF1促细胞增殖的用途

说明书

本发明公开了黄芩提取物‑FGF1复合物，它是黄芩提取物与FGF1共孵化获得的复合物，所述的黄芩提取物为黄芩苷、千层纸素A‑7‑0‑β‑D‑葡萄糖醛酸苷或汉黄芩苷，获得的复合物为FGF1‑黄芩苷复合物、FGF1‑千层纸素A‑7‑0‑β‑D‑葡萄糖醛酸苷复合物或FGF1‑汉黄芩苷复合物；所述的孵化为：1）用甲醇溶解黄芩提取物，氮气吹干，用水复溶；将FGF1靶蛋白溶解于PBS缓冲液，和黄芩提取物甲醇溶液，混合，在36~38℃下孵化25~35min，真空冷冻干燥；FGF1‑黄芩苷复合物、FGF1‑千层纸素A‑7‑0‑β‑D‑葡萄糖醛酸苷复合物和/或FGF1‑汉黄芩苷复合物在促细胞增殖方面的应用。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及黄芩三种成分协同增强FGF1促NIH3T3细胞增殖的用途。

背景技术

生物活性成分的筛选是中药研究领域的重要内容。传统的化学分离、结构鉴定、活性筛选模式到活性导向化学分离存在目标不明确、操作繁琐、工作量大、周期长、活性成分在分离过程中易丢失等诸多不足。现代药理学研究表明，药物与生物大分子(如酶、受体、DNA、RNA等)的亲和是其发挥作用的第一步。我们开发了一种快速筛选中药中生物活性成分的方法：多室电泳分离系统并联用高效液相色谱串联质谱技术。该技术能在生理状态将溶液状态的蛋白质分离，满足靶分子亲和技术中快速将靶分子－活性分子复合物从孵育溶液中分离出来，减少分离过程中复合物解离的要求。多室电泳的优势在于：1）具有简便快速、作用靶点明确、靶点无需标记、筛选单靶点多成分、筛选多靶点多成分等；2）多室、多维、体外“可视”、动态分析活性成分与靶点的协同作用及变化；3）从单方或复杂组方活性成分中筛选与已知靶点结合的未知活性成分，同时发现促进已知成分与靶点的结合效应的活性成分。该技术与已有筛选技术相比，具有简便快速、作用靶点明确、靶点无需标记、无需固定化、筛选单靶点多成分、筛选多靶点多成分等优势。研究报道：基于多室电泳分离系统在pH为7.4，电压8V，分离时间15min的条件下从孵化后的溶液中分离出酶-活性成分复合物，并联用高效液相色谱串联质谱技术对筛选出的活性成分进行定性分析，并筛选出七种潜在的α–葡萄糖苷酶抑制剂。

黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)是唇形科植物黄芩的根部，主要药用，具有去热燥湿、清火解毒、安胎、调节免疫、防治糖尿病、抗炎抗凋亡等作用。主治湿温，暑湿，胸闷呕恶，湿热痞满，黄疸泻痢，肺热咳嗽，高热烦渴，血热吐衄，胎动不安。相关研究表明，黄芩的抗菌及抗病毒作用较强，其所含的黄芩素及黄芩苷可有效抑制体外多种革兰氏阳性及阴性菌，并能对导致病性皮肤真菌起到有效的抑制作用，此外黄芩苷及黄芩素在抗肿瘤、抗过敏、抗动脉粥样硬化以及对肝脏和中枢神经系统保护中也有一定的作用。黄芩中富含的多种黄酮类化合物，其中汉黄芩苷具有一定的抗肿瘤活性，千层纸素A-7-0-β-D-葡萄糖醛酸苷具有抗氧化作用。因此，其药理应用广泛及开发前景广阔，具有较大的研究应用空间。

FGF1是成纤维细胞生长因子（Fibroblast growth factor，FGF）家族中的一个成员，是由155个氨基酸组成的蛋白质，FGF家族具有促进细胞发育、细胞增殖、转移和分化等功能。FGF1为FGF家族中的一员，因其等电点偏酸性，又被称为酸性成纤维细胞生长因子（acid fibroblast growth factor，aFGF）。FGF1能结合和激活四种FGFRs，FGFRs的激活刺激胞内信号通路，包括PKC/PLCγ、PI3K/Akt 和RAS/MAPK 级联。利用酵母双杂交筛选和质谱分析经串联亲和纯化或与重组FGF1共沉淀后的配合物，在20个新发现的FGF1配合物中有10个与细胞凋亡、细胞周期和增殖有关，提示细胞内FGF1在细胞存活中起着重要作用。FGF1不仅有激活细胞表面特定受体的经典作用方式，也可以独立于受体激活的信号通路来保护细胞免受应激条件的影响，然而越来越多的研究表明FGF1与代谢稳态有关。

发明内容

本发明目的是为解决中药成分之间的协同作用及中药与蛋白药物联合给药的协同作用的问题，而提供