[发明专利]大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_swi3及其应用

说明书

本发明公开一株保藏编号为CCTCC NO：M 2019467的大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_swi3，该噬菌体属于肌尾噬菌体科，具有呈多面体的头部和可伸缩的尾部结构，头部直径约80nm，尾部长约120nm；在固体培养基上可形成透亮的空斑，周围无晕环，边缘清晰规则，直径约1～1.5mm；该噬菌体对养殖环境中的猪源和鸡源的大肠杆菌，特别是猪源和鸡源的致病性大肠杆菌具有良好的裂解效果，在防治猪大肠杆菌病和鸡大肠杆菌病的药物制剂、饲料添加剂等多个方面具有十分广阔的的应用前景。

技术领域

本发明属于生物工程领域，尤其涉及一株大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_swi3及其应用。

背景技术

大肠杆菌属于条件致病菌，致病力的强弱与大肠杆菌的血清型有关，不同动物之间也存在差异性。其中，猪大肠杆菌病和鸡大肠杆菌病是在养殖环境中广泛存在的，一旦染病会引起腹泻、明显影响动物机体的增重，使动物群体的死亡率急剧上升，发病动物还可以通过粪便等途径传染给其它健康的养殖动物造成大面积感染，而且养殖环境中的猪源和鸡源大肠杆菌会造成动物群体的持续感染，给养殖户造成很大的经济损失。

目前，使用抗生素是养殖场防治大肠杆菌病的主要手段，但是由于抗生素的大量滥用，导致其存在破坏动物肠道微生物菌群结构、抗生素残留、大肠杆菌严重耐药及多重耐药等缺陷，加大了疾病防控的难度，使得养殖成本不断增加，给养殖业的发展造成巨大的阻力。

噬菌体是一种细菌依赖性病毒，能够特异性的裂解宿主细菌，且与抗生素杀菌的作用机制不同，噬菌体裂解细菌不受细菌耐药性的影响，且无残留，具有研发时间短、成本低、特异性强、给药量少、不破坏正常菌群构成等优点，在耐药菌的防治工作中已取得一系列可喜成果。理论上，任何致病菌都有其对应的噬菌体，但目前我们找到的噬菌体种类和数量只是冰山一角，还有大量的噬菌体资源尚未开发。发掘能同时裂解多种不同动物来源细菌的噬菌体在临床上具有更广阔的应用前景，因此开发具有上述特征的噬菌体制剂对于养殖业的健康快速发展而言意义重大。

发明内容

本发明针对上述问题，提出一种能够同时且高效杀灭养殖环境中猪源和鸡源致病性大肠杆菌的噬菌体。

为了达到上述目的，本发明采用的技术方案为：

本发明提供了一种大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_swi3，噬菌体保藏编号为CCTCC NO：M2019467，于2019年6月19日保藏于中国典型培养物保藏中心，分类命名为Escherichiacoli phage vB_EcoM_swi3，保藏地址为中国·武汉·武汉大学。

上述大肠杆菌噬菌体在固体培养基上可以形成透亮的空斑，周围无晕环，边缘清晰规则，直径为1～1.5mm；经透射电子显微镜观察发现，该大肠杆菌噬菌体具有明显的正多面体头部结构和可伸缩的尾部结构，头部直径约80nm，尾部长约120nm，经鉴定该大肠杆菌噬菌体属于肌尾噬菌体科。

对上述大肠杆菌噬菌体进行了一系列的性能测定，结果如下：

a.通过效价测定和最佳感染复数测定实验得出，该大肠杆菌噬菌体的效价为6.4×10⁸pfu/mL，最佳感染复数为1；

b.通过pH、热及紫外线稳定性实验得出，该大肠杆菌噬菌体在pH6-8的中性条件下性能较为稳定、对紫外线较为敏感、当温度在60℃以下时，活性较为稳定；

c.通过一步生长曲线测定得出，该大肠杆菌噬菌体的潜伏期约为25min，爆发期约为75min，爆发量约为25；

d.通过小鼠安全性实验得出，该大肠杆菌噬菌体对小鼠正常生长不产生负面影响，且解剖检查未见异常情况，说明该大肠杆菌噬菌体表现出较高的安全性；