[发明专利]一种竹节诱导愈伤组织再生植株的方法

说明书

本发明提供了一种竹节诱导愈伤组织再生植株的方法，属于植物组织培养技术领域。本发明将消毒的试管苗切取长度0.1～8cm带芽竹节为外植体，接种至含1～3mg/L2,4‑D的MS培养基上诱导培养，得到愈伤组织；将愈伤组织接种至增殖培养基上增殖培养，得到的颗粒致密的愈伤组织接种至含0.5～2mg/L6‑BA、2～4mg/LKT、1mg/LZT、0.5～1mg/LTDZ的MS培养基上分化培养，得到再生苗。本发明通过对植物生长调节物质筛选、竹节大小位置、培养周期等优化筛选，促进竹节愈伤组织诱导与分化体系，建立高效再生体系，为建立花叶矢竹转基因技术体系、定向改良培育新竹种提供技术支撑。

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种竹节诱导愈伤组织再生植株的方法。

背景技术

竹子有着特殊的开花习性，开花周期长，难以预测，且开花后竹子通常会死亡，且结实率低(林树燕等，2008)，难以通过有性繁殖途径进行繁殖和选育新品种；无性繁殖又因长距离运输困难、移栽存活率低、有限的生根能力及季节依赖等因素导致造林成本高。组织培养具有繁殖速度快、增殖系数高、花费少等优点，且不受季节限制，广泛应用于植物的离体快繁(沈春修，2018；谭宏超等，2017)。植物遗传育种改良可通过遗传转化技术，但建立一个稳定高效的再生体系是遗传转化技术成功的前提。目前关于遗传转化的报道仅限麻竹(Dendrocalamus latiflorus)(YES et al.,2017)、马来甜龙竹(Dendrocalamus asper)(诸葛菲，2018)和梁山慈竹(Dendrocalamus farinosus)(李晓瑞等，2012)，主要原因是建立竹类再生体系困难。1968年，Alexander等首次利用离体培养技术，以竹子的成熟种胚为外植体成功获得了完整植株。而后竹子的组织培养技术逐渐得到发展，目前已有近80多个竹种获得再生植株(臧巧路等，2016)。Metha等(1982)首次报道了利用印度箣竹(Bambusaarundinacea)的体细胞胚胎建立其再生体系，而后研究出多种外植体来建立其再生体系，包括以种子为外植体的牡竹(Dendrocalamus strictus)(RAO et al.,1985)、墨西哥雨竹(Otatea acuminatea aztecorum)(Woods et al.1992)、麻竹(Sinocalamus latiflora)(Yeh et al.1987)、版纳甜龙竹(Dendrocalamus hamiltoniiNees et Arn.exMunro)(张宁，2010)、孝顺竹(Bambusa multiplex)(Yuan2009)、和马来甜龙竹(Dendrocalamusasper)(诸葛菲2018)；以花药为外植体的麻竹(D.latiflorus)(Tsay et al.1990)；以幼嫩花序为外植体的绿竹(Bambusaoldhami)(Yeh et al.1986)、孝顺竹(B.multiplex)(袁金玲等，2009)、吊丝球竹(Bambusa beecheyana)(Yeh et al.1986)的；以芽为外植体的版纳甜龙竹(Dendrocalamus hamiltonii Neeset Arn.ex Munro)(张宁等，2016)、绿竹(Bambusaoldhami)、翠竹(Sasa pygmaea)、凤凰竹(Bambusa multiplex)、和罗汉竹(phyllostachysaurea)(Huang et al.1988)。但因为竹子特有的开花特性，种子和花药获取困难，不能随时进行取材。而竹节居间分生组织材料充足，可随时取材，外植体选择有较大优势。

关于竹子愈伤组织再生体系的报道仍旧很少，目前只集中在少数丛生竹和唯一的散生型竹种毛竹上，而混生型竹种的愈伤组织再生体系目前还尚未见报道，主要困难集中在可选择能再生的外植体较少、有效愈伤组织诱导率低、愈伤组织分化困难，这些使竹种再生频率非常低，与其他禾本科植物或模式植物无法比拟，大大限制基因功能验证的研究进程。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种竹节诱导愈伤组织再生植株的方法，以竹节为外植体，配合独特培养基配方诱导愈伤组织，取得了诱导率高且分化率高的再生植株。