[发明专利]一种鉴别茴香蜂蜜的方法

说明书

本发明涉及鉴别茴香蜂蜜的方法，所述方法包括如下步骤：(1)以异硫氰酸苯酯为衍生化试剂对待测蜂蜜样品中的亮氨酸和异亮氨酸进行衍生化处理；(2)采用液相色谱‑串联质谱法对蜂蜜样品中的亮氨酸和异亮氨酸的衍生物进行定量检测从而确定蜂蜜样品中的亮氨酸和异亮氨酸的含量；(3)对蜂蜜样品中亮氨酸和异亮氨酸含量和比值进行对比分析，确定待测样品是否为茴香蜂蜜。

技术领域

本发明属于生物化学技术领域，具体的，涉及一种鉴别茴香蜂蜜的方法。

背景技术

蜂蜜是蜜蜂采集植物的花蜜、分泌物或蜜露，与自身分泌物混合后，经充分酿造而成的天然甜物质。蜂蜜中具有糖类和氨基酸等营养成分，同时，对抗菌，增强免疫功能，止咳润肺，加速创伤组织的修复，抗肿瘤等方面有一定的作用，现已是人们日常消费的主要食品之一。我国的土地辽阔，蜂蜜产量、种类均居世界首位。但是，不同蜜源蜂蜜在营养价值、保健功效、甚至感官特征上有很大的不同。

茴香蜜是以茴香为蜜源植物，多产自于中国甘肃等地区。茴香蜜呈琥珀色，质地粘稠，有微结晶现象。茴香蜜中含有糖类、多酚类、氨基酸、蛋白质等多种营养成分，与大宗的蜂蜜相比，茴香蜜中的黄酮类和酚类物质等成分含量较高，能有效的消除自由基，具有良好的抗氧化活性。

氨基酸是蜂蜜中非常重要的营养成分，已有报道说蜂蜜中的氨基酸含量可以影响蜂蜜的抗氧化活性。由于蜂蜜中的氨基酸主要来源于花粉，所以不同蜜源植物的蜂蜜中氨基酸含量和种类存在巨大差异。因此，蜂蜜中的氨基酸含量可以作为蜜种判别的依据。目前较为广泛的氨基酸测定方法主要是柱前衍生液相色谱法。本发明建立了超高压液相色谱质谱法测定蜂蜜中的氨基酸，可实现游离氨基酸的准确、快速测定。以氨基酸为特征标志物对茴香蜂蜜进行鉴别的方法的确立，对于茴香蜂蜜的准确鉴别具有重要意义，有利于特色单花种蜂蜜的准确识别和推广生产。

目前尚未见采用氨基酸组成，尤其是亮氨酸与异亮氨酸的含量与比例来鉴别茴香蜂蜜的方法。

发明内容

本发明首先涉及一种鉴别茴香蜂蜜的方法，所述的方法包括如下步骤：

(1)以异硫氰酸苯酯和三乙胺为衍生化试剂对待测蜂蜜样品中的亮氨酸和异亮氨酸进行衍生化处理；

(2)采用液相色谱-串联质谱法对蜂蜜样品中的亮氨酸和异亮氨酸的衍生物进行定量检测从而确定蜂蜜样品中的亮氨酸和异亮氨酸的含量；

(3)对蜂蜜样品中亮氨酸和异亮氨酸含量和比值进行对比分析，确定待测样品是否为茴香蜂蜜。

步骤(1)所述对待测蜂蜜样品中的亮氨酸和异亮氨酸进行衍生化处理具体为：通过异硫氰酸苯酯和三乙胺将待测蜂蜜样品中的亮氨酸和异亮氨酸分别衍生化苯氨基硫甲酰亮氨酸和苯氨基硫甲酰异亮氨酸。

步骤(1)所述对待测蜂蜜样品中的亮氨酸和异亮氨酸进行衍生化处理具体为：

a)蜂蜜样品通过盐酸水溶液溶解；

b)进行衍生化反应，并且衍生化反应时向蜂蜜样品溶液中添加正亮氨酸内标标准品；

c)加入乙酸溶液终止衍生化反应；

d)加入正己烷进行提取；

优选的，所述步骤(1)具体为：

a)待测蜂蜜样品称样量为1g，加入0.1mol/L盐酸溶液25mL，使样品完全溶解得待测样品稀释液。

b)取1mL待测样品稀释液，加入含量为100μg/mL的正亮氨酸内标标准品40μL；加入1.2％异硫氰酸苯酯溶液和14％三乙胺溶液各0.5mL，混匀后常温下反应1h；

c)加入20％乙酸溶液0.1mL；

d)加入正己烷2mL提取2min，静置分层后吸取下层溶液过滤除菌，即为待测液。