[发明专利]一种同步异养硝化-好氧反硝化门多萨假单胞菌的培养方法及应用

说明书

本发明公开了一种同步异养硝化‑好氧反硝化门多萨假单胞菌的培养方法及应用，其中，所述步骤为：A、菌株的收集与保存，B、菌株培养，本发明的门多萨假单胞菌不仅具备优良的好氧反硝化性能，同时还具异养硝化作用作用，在生活污水及其他各种污染水体治理中具有较高的应用价值，运用到膜生物反应器中，能有效降低膜生物反应器生活污水中的硝态氮和总氮的含量，对开发脱氮微生物制剂或污水处理剂具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种同步异养硝化-好氧反硝化门多萨假单胞菌的培养方法及应用。

背景技术

当今，因人类活动影响，城市河道及相对开放的水域氨氮指标高居不下。由此引发的生态环境问题已经对人类居家环境和城市形象产生重大影响。微生物修复水环境成为目前研究的热点领域，目前在针对污水水体氨氮、亚硝酸盐、硝酸盐的去除也正在随着对硝化细菌，反硝化细菌的研究而逐渐提升到新的层次。

废水中存在着有机氮、氨氮、硝态氮等形式的氮，其中以氨氮和有机氮为主要形式。在生物梳理过程中，有机氮被一样微生物氧化分解，即通过氨化作用转化为氨氮，而后经硝化过程转化为亚硝态氮和硝态氮，最好通过反硝化作用使硝态氮转化为氮气，逸入大气，从而降低废水中N的含量。

传统的生物脱氮由硝化细菌和反硝化细菌共同完成，本世纪以来，逐步发现某些可实现同步异养硝化和好氧反硝化的细菌，异养硝化和好氧反硝化的发现打破了相对传统的生物脱氮理论，使得同步异养硝化和好氧反硝化成为可能，该技术不仅较少工艺上的冗余操作，同时也降低了运行成本。

传统同步异养硝化和好氧反硝化细菌发酵效率低，活菌数少，且培养成本高。

发明内容

本发明的目的在于提供种同步异养硝化-好氧反硝化门多萨假单胞菌的培养方法及应用，以解决上述的技术问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种同步异养硝化-好氧反硝化门多萨假单胞菌的培养方法，其特征在于，所述步骤为：

A、菌株的收集与保存：

a1、由好氧曝气池分离得到门多萨假单胞菌，将门多萨假单胞菌保存于LB固体平板中，并在4℃条件下冷藏储存于冰箱中，备用；

B、菌株培养：

b1、对保存的门多萨假单胞菌单菌进行挑取并接种于LB培养基中，培养条件为30℃，溶解氧为3-4mg/l，培养18h,离心，得沉淀菌体，菌体通过无菌水洗涤得到菌悬液；

b2、将菌悬液通过无菌操作接种到种子培养基中，进行培养，培养条件为35℃，溶解氧为3-6mg/l，pH为6-8；

b3、待种子培养基培养18-24h后，按5％-10％的接种量移液至灭菌过的发酵培养基中，培养条件为35℃，溶解氧为3-6mg/l，pH为6-8；

b4、待发酵8-10h后，于发酵培养基中进行第一次补料培养基添加，且补料培养基为发酵液体积的8％-12％；

b5、待连续发酵10h后，于发酵培养基中进行第二次补料培养基添加，补料体积为发酵液体积的3％-7％；

b6、继续发酵培养8h，结束后，即得到纯种发酵液。

优选的，所述种子培养基包括：乙酸钠5-10g/l，蛋白胨5-10g/l，酵母粉1-5g/l，氯化钠1-5g/l，磷酸氢二钾2-4g/l,硫酸镁0.05-0.5g/l，硫酸锰0.05-0.5g/l。

优选的，所述发酵培养基包括：淀粉5-10g/l，蛋白胨5-10g/l,磷酸氢二钾2-5g/l，硫酸铵2-5g/l，硫酸镁0.05-0.5g/l，硫酸锰0.05-0.5g/l。