[发明专利]IV类脱氧核酶突变体及其制备方法与应用有效
| 申请号： | 202011118638.7 | 申请日： | 2020-10-19 |
| 公开（公告）号： | CN112175954B | 公开（公告）日： | 2022-09-09 |
| 发明（设计）人： | 顾宏周;张灿钰;李青婷 | 申请（专利权）人： | 复旦大学附属肿瘤医院 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12P19/34 |
| 代理公司： | 上海容慧专利代理事务所(普通合伙) 31287 | 代理人： | 于晓菁 |
| 地址： | 200032 *** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | iv 脱氧 突变体 及其 制备 方法 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种IV类脱氧核酶突变体的体外筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)构建两个DNA单链文库，互为引物进行聚合酶链式反应获得线性单链DNA：所述两个单链DNA文库的序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2的末端含有的互补区域；且SEQ ID NO.2末端带有rC修饰；
(2)以所述线性单链DNA为底物进行第一次环化反应；
(3)预筛选、筛选、成环、PCR扩增、二次成环；所述二次成环的引物如SEQ ID NO.3、SEQID NO.4所示。
2.根据权利要求1所述的脱氧核酶突变体的体外筛选方法，其特征在于，还包括以下步骤：将权利要求1所述的步骤(3)获得产物的碱基进行部分随机化处理后，重复多次进行以下步骤：第一次环化反应、预筛选、筛选、成环、PCR扩增、二次成环；和/或
所述预筛选为：环化后的单链DNA文库通过PAGE分离回收，加入哌啶，加热；通过变性PAGE分离回收、常温洗脱；和/或
所述筛选为将预筛选获得的环状DNA在缓冲液1中变性，室温放置后加入预热好的等体积的缓冲液2，孵育，通过变性PAGE回收发生切割的线性DNA片段；所述缓冲液1的组分包括HEPES和LiCl；所述缓冲液2的组分包括HEPES、LiCl、MgCl2和ZnCl2。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于复旦大学附属肿瘤医院，未经复旦大学附属肿瘤医院许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202011118638.7/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
