[发明专利]一种小柴胡颗粒中柴胡皂苷类成分的检测方法

权利要求书

1.一种小柴胡颗粒中柴胡皂苷类成分的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、溶液配制：

对照品溶液配制：取柴胡皂苷C(SSc)、I(SSi)、H(SSh)、A(SSa)、B₂(SSb₂)、G(SSg)、B₁(SSb₁)对照品适量，精密称定，分别置于容量瓶中，加入甲醇溶解，配制成所需浓度的对照品溶液，备用；

混合对照品溶液配制：精密量取所述7种对照品溶液，配制成所需质量浓度的混合对照品溶液，备用；

供试品溶液配制：小柴胡颗粒适量，研细，精密称定，加水使其完全溶解，经活化好的C18固相萃取小柱，依次以含5％浓氨或1％NaOH的10％甲醇溶液、30％甲醇和分析纯甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至容量瓶，微孔滤膜过滤，即得供试品溶液；

S2、高效液相色谱-电喷雾检测器联用进行含量分析：

分别精密吸取经步骤S1制得的所述混合对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算；采用电喷雾检测器进行色谱峰的检测；

色谱条件：流动相A：含0.01％乙酸或0.01％甲酸的水溶液、10％乙腈-90％水溶液(含0.1mmol乙酸铵，pH为4.0)；流动相B：色谱纯乙腈、90％乙腈-10％水溶液(含0.1mmol乙酸铵，pH为4.0)，进行梯度洗脱；色谱柱Waters CORTECTS C18或色谱柱Thermo HypersilGOLD；柱温：25-35℃；流速：0.7-0.9mL/min；

电喷雾检测器条件：电喷雾检测器，氮气压力：35-50psi，量程：100pA，电喷雾温度：50℃。

2.根据权利要求1所述的小柴胡颗粒中柴胡皂苷类成分的检测方法，其特征在于，S1中，所述C18固相萃取小柱先用甲醇6mL预洗，再用水10mL平衡。

3.根据权利要求1所述的小柴胡颗粒中柴胡皂苷类成分的检测方法，其特征在于，S2中，所述色谱柱Waters CORTECTS C18的柱长为15cm，内径为4.6mm，填料粒径为2.7μm。

4.根据权利要求1所述的小柴胡颗粒中柴胡皂苷类成分的检测方法，其特征在于，S2中，所述色谱柱Thermo Hypersil GOLD的柱长为15cm，内径为4.6mm，填料粒径为3μm。

5.根据权利要求1所述的小柴胡颗粒中柴胡皂苷类成分的检测方法，其特征在于，所述色谱柱Waters CORTECTS C18或色谱柱Thermo Hypersil GOLD采用十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂。

6.根据权利要求1所述的小柴胡颗粒中柴胡皂苷类成分的检测方法，其特征在于，当所述流动相A采用含0.01％乙酸或0.01％甲酸的水溶液，所述流动相B采用色谱纯乙腈时，所述洗脱梯度为：

0～55min，30～32％B；

55～58min，32～90％B；

58～61min，90～30％B；

61～70min，30％B。

7.根据权利要求1所述的小柴胡颗粒中柴胡皂苷类成分的检测方法，其特征在于，当所述流动相A采用含0.1mmol乙酸铵(pH为4.0)的10％乙腈水溶液，所述流动相B采用含0.1mmol乙酸铵(pH为4.0)的90％乙腈水溶液时，所述洗脱梯度为：

0～35min，25～35％B；

35～37min，35～90％B；

37～45min，90～25％B；

45～50min，25％B。