[发明专利]疫苗融合蛋白

说明书

本申请涉及一种融合蛋白，所述融合蛋白包括SARS‑CoV‑2抗原多肽和鞭毛蛋白或其片段。本申请还提供了所述融合蛋白的制备方法和用途。本申请所述的融合蛋白能够诱导机体产生针对SARS‑CoV类病毒的抗原的细胞免疫反应。

技术领域

本申请涉及生物医药领域，具体的涉及一种包含SARS-CoV-2抗原多肽和鞭毛蛋白或其片段的融合蛋白。

背景技术

细菌鞭毛蛋白（flagellin）作为TLR5的天然配体，是一种强有力的激动剂，可被用作佐剂，激活机体天然免疫反应和获得性免疫反应。TLR5在黏膜固有层DCs中高表达，通过激活下游MyD88信号通路，鞭毛蛋白可促使细胞分泌细胞固和趋化因子，快速诱导天然免疫应答，活化的DCs迁移到次级淋巴器官，促进获得性免疫应答。鞭毛蛋白N端和C端由高度保守的α螺旋组成，构成TLR5的识别位点，且序列中间高变异区缺失不会显著影响其促炎性反应和佐剂活性，因此可将抗原与鞭毛蛋白保守区融合表达，增强其佐剂效应。

以细菌鞭毛蛋白为佐剂的疫苗具有低剂量有效性，可避免疫苗对机体产生副作用。鞭毛蛋白能诱导产生黏膜IgA，具有良好的黏膜佐剂效应。基于鞭毛蛋白的融合蛋白所形成的重组疫苗，较易生产且生产成本低。

2019年暴发的新冠病毒（2019-nCoV）疫情是21世纪人类遭遇的第三次冠状病毒袭击，可引起严重的人类呼吸系统疾病，具有较高的致死率。目前，尚无有效的药物用于治疗新冠病毒，开发针对性的疫苗是避免病毒大范围传播，疫情防控的长期有效办法。

发明内容

本申请提供了一种融合蛋白，所述融合蛋白包括SARS-CoV-2抗原多肽和鞭毛蛋白或其片段。本申请所述的融合蛋白能够识别相应的受体（例如，血管紧张素转化酶2（ACE2）），能够诱导生物体产生相应的抗体，该抗体可以识别SARS-CoV类病毒的棘突蛋白（S1蛋白），从而诱导机体产生特异性的细胞免疫反应。

本申请所述的融合蛋白，能够正确表达且成分单一，构象正确，并且能够被受体ACE2识别并相互作用。使用本申请的融合蛋白免疫机体后产生的血清中包含不同类型的SARS-CoV-2病毒的S蛋白的抗体，可正确识别SARS-CoV-2病毒的S蛋白。本申请的融合蛋白能够刺激机体产生抑制SARS-CoV-2病毒感染细胞的抗体，且与病毒感染痊愈病人的血清抗体竞争结合病毒蛋白，还能诱导机体长生活化的T细胞，促进细胞因子的分泌。因此，本申请的融合的蛋白可开发作为SARS-CoV-2病毒的重组疫苗蛋白，具有重要的应用价值。

本申请所述的鞭毛蛋白或其片段可以发挥佐剂功能，增强宿主对SARS-CoV-2抗原多肽的免疫应答。在某些情形中，所述鞭毛蛋白或其片段可以将针对SARS-CoV-2抗原多肽的免疫应答增强至少约1.5、2、3、4、5、10、15、20、30、40、50、60、75、100、150、500、1000倍或者以上。在另一些情形中，所述鞭毛蛋白或其片段可以减少实现特定水平的免疫应答（细胞和/或体液和/或粘膜的）所需的SARS-CoV-2抗原多肽的量，例如，减少至少约15%、25%、35%、50%、65%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或以上。在另一些情形中，所述鞭毛蛋白或其片段可以延长免疫应答持续的时间（例如，延长至少约1.5倍、2倍、3倍、5倍、10倍、20倍以上或者更长的时间）。

一方面，本申请提供了一种融合蛋白，所述融合蛋白包括SARS-CoV-2抗原多肽和鞭毛蛋白或其片段，其中所述SARS-CoV-2抗原多肽包含B细胞表位热点区域I和/或B细胞表位热点区域II，所述B细胞表位热点区域I包含SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列，所述B细胞表位热点区域II包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。

在某些实施方式中，所述鞭毛蛋白或其片段包括鞭毛蛋白的N端恒定区和鞭毛蛋白的C端恒定区。

在某些实施方式中，所述SARS-CoV-2抗原多肽位于所述鞭毛蛋白的N端恒定区和所述鞭毛蛋白的C端恒定区之间。