[发明专利]外周血单个核细胞的冻存方法有效
| 申请号： | 202011124306.X | 申请日： | 2020-10-20 |
| 公开（公告）号： | CN112219838B | 公开（公告）日： | 2021-10-15 |
| 发明（设计）人： | 吴道贫;陶然;覃绍君;赖小华 | 申请（专利权）人： | 广州准优生物科技有限公司 |
| 主分类号： | A01N1/02 | 分类号： | A01N1/02 |
| 代理公司： | 广州华进联合专利商标代理有限公司 44224 | 代理人： | 戴志攀 |
| 地址： | 510000 广东省广州市开发区国*** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 外周血 单个 细胞 方法 | ||
1.一种外周血单个核细胞的冻存方法，其特征在于，包括以下步骤：
将外周血单个核细胞与预处理液混合，于-10℃～4℃接触≥20min；所述预处理液中含有海藻糖和抗坏血酸；所述预处理液中，所述海藻糖的浓度为50mmol/L～150mmol/L，所述抗坏血酸的浓度为0.125mmol/L～0.375mmol/L；
从所述预处理液中分离外周血单个核细胞，然后与冻存液混合，经程序性降温后转入液氮中保存；所述冻存液中含有海藻糖、抗坏血酸、ROCK激酶抑制剂、DMSO和血清；所述冻存液中，所述海藻糖的浓度为50mmol/L～150mmol/L，所述抗坏血酸的浓度为0.125mmol/L～0.375mmol/L，所述ROCK激酶抑制剂的浓度为5mmol/L～15mmol/L，所述血清的体积百分比为70％～90％，所述DMSO的体积百分比为8％～12％。
2.根据权利要求1所述的冻存方法，其特征在于，所述预处理液中，所述海藻糖的浓度为90mmol/L～110mmol/L，所述抗坏血酸的浓度为0.2mmol/L～0.3mmol/L。
3.根据权利要求1所述的冻存方法，其特征在于，所述预处理液中，所述海藻糖的浓度为100mmol/L，所述抗坏血酸的浓度为0.25mmol/L。
4.根据权利要求1所述的冻存方法，其特征在于，所述冻存液中，所述海藻糖的浓度为90mmol/L～110mmol/L，所述抗坏血酸的浓度为0.2mmol/L～0.3mmol/L，所述ROCK激酶抑制剂的浓度为9mmol/L～11mmol/L。
5.根据权利要求1所述的冻存方法，其特征在于，所述冻存液中，所述海藻糖的浓度为100mmol/L，所述抗坏血酸的浓度为0.25mmol/L，所述ROCK激酶抑制剂的浓度为10mmol/L。
6.根据权利要求1～5任一项所述的冻存方法，其特征在于，所述外周血单个核细胞以白膜层细胞的形式与所述预处理液混合。
7.根据权利要求6所述的冻存方法，其特征在于，所述白膜层细胞通过以下步骤得到：获取外周血并离心收集血细胞沉淀，采用淋巴细胞分离液进行密度梯度离心，收集白膜层细胞。
8.根据权利要求1～5任一项所述的冻存方法，其特征在于，所述接触的过程伴随外周血单个核细胞的离心分离。
9.根据权利要求1～5任一项所述的冻存方法，其特征在于，所述外周血单个核细胞与所述冻存液混合后，细胞密度为(0.5～2)×107个/mL。
10.根据权利要求1～5任一项所述的冻存方法，其特征在于，所述ROCK激酶抑制剂包括AR-12286、Y-27632和SNJ-1656中的一种或多种。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于广州准优生物科技有限公司，未经广州准优生物科技有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202011124306.X/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
