[发明专利]一种测定高分子量透明质酸分子量的方法

说明书

本申请提供一种测定高分子量透明质酸分子量的方法，其特征在于，包括如下步骤：取待测样品高分子量透明质酸，将其溶解，得到初始溶液；向所述初始溶液中加入盐类化合物，得到待测样品溶液；联用体积排阻色谱和多角度激光光散射法测定所述待测样品溶液中高分子量透明质酸的分子量。本申请的方法特别适合于检测分子量为2000～3000kDa的透明质酸的分子量。

技术领域

本发明涉及透明质酸的检测领域，具体涉及一种多角度激光光散射法测定透明质酸分子量、特别是高分子透明质酸分子量的方法。

背景技术

透明质酸(hyaluronic acid，HA)是由乙酰葡糖胺和葡糖醛酸的双糖单位重复交替连接形成的高分子粘多糖，由于其特殊的生物学特性和生理功能，已被广泛应用于化妆品及医学领域。HA的相对分子质量大小是表征其特性的基本参数之一，HA的生物学性质与其相对分子量大小有密切的关系。不同相对分子量透明质酸，其生理活性也不相同，甚至具有完全相反的作用。例如，分子量大于2000kDa的HA具有较好的保湿性、黏弹性、润滑、抑制炎性反应等功能，可用于眼科手术、骨关节注射制剂；分子量1000kDa～2000kDa的HA具有良好的保湿性、润滑性及药物缓释作用，广泛用于化妆品、滴眼液和皮肤烧伤愈合；分子量10kDa～80kDa的属低分子HA，口服能被肠道吸收，补充机体HA的不足，发挥保健和美容养颜的功效；HA寡聚糖(分子量小于10kDa)具有抗肿瘤、促进骨和血管生成作用，具有潜在的医学应用前景。

透明质酸分子量的测定方法主要有粘度法、分子体积排阻色谱法(SEC)和多角度激光光散射法(MALS)。粘度法获得的只是样品的相对分子质量，且受环境影响较大；SEC法需要分子量标准品，而市场上没有不同分子量HA的标准品，只能用与透明质酸结构相同的多糖来代替，准确性差。多角度激光光散射联用体积排阻色谱法(MALS-SEC)无需用标准品做参照，就能得到分子量结果，操作简单，节约时间。目前较多的是对2000kDa以下的透明质酸的分子量和分布的测定，采用MALS-SEC测定高分子量透明质酸分子量的研究较少，且实际操作发现采用常规的MALS-SEC测定高分子量透明质酸分子量时存在色谱柱残留以及所测分子量偏差大、拖尾等问题。

发明内容

为解决上述技术问题，本申请对现有方法进行了优化，通过将待测样品溶解，得到初始溶液，随后向待测初始溶液中添加一定量的盐类化合物，再利用MALS-SEC进行分子量测定，确定了一种测定高分子量透明质酸分子量的方法。

本申请的具体技术方案如下：

1.一种测定高分子量透明质酸分子量的方法，其特征在于，包括如下步骤：

取待测样品高分子量透明质酸，将其溶解，得到初始溶液；

向所述初始溶液中加入盐类化合物，得到待测样品溶液；

联用体积排阻色谱和多角度激光光散射法测定所述待测样品溶液中高分子量透明质酸的分子量。

2.根据项1所述的方法，其特征在于，所述初始溶液中待测样品的浓度为0.01～0.02mg/mL。

3.根据项1或2所述的方法，其特征在于，所述盐类化合物为氯化钠、硝酸钠或硫酸钠，优选为氯化钠；

优选所述待测样品溶液中所述盐类化合物的浓度为所述初始溶液中待测样品的浓度的2000～4000倍，更优选为3500～4000倍。

4.根据项1～3中任一项所述的方法，其特征在于，使用所述体积排阻色谱的流动相溶解所述待测样品，得到所述初始溶液。

5.根据项1～4中任一项所述的方法，其特征在于，所述流动相中包含氯化钠，所述氯化钠的浓度为0.1～0.2mol/L；

优选地，所述流动相包含氯化钠和叠氮化钠。