[发明专利]一种病毒富集材料及其制备方法和应用、病毒富集体系及其应用有效

专利信息
申请号: 202011136699.6 申请日: 2020-10-22
公开(公告)号: CN112246222B 公开(公告)日: 2021-06-01
发明(设计)人: 杨栋;周树青;李君文;谌志强;金敏;尹静;陈郑珊;师丹阳;李海北;谭蓉;董辉伟;杨忠委;王华然 申请(专利权)人: 军事科学院军事医学研究院环境医学与作业医学研究所
主分类号: B01J20/22 分类号: B01J20/22;B01J20/28;B01J20/30;C12N7/02;C12Q1/24;C12R1/93
代理公司: 北京高沃律师事务所 11569 代理人: 赵琪
地址: 300041*** 国省代码: 天津;12
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摘要:
搜索关键词: 一种 病毒 富集 材料 及其 制备 方法 应用 体系
【说明书】:

发明提供了一种病毒富集材料及其制备方法和应用、病毒富集体系及其应用,属于病毒富集与吸附技术领域。本发明提供的病毒富集材料包括石墨烯四氧化三铁颗粒和附着于所述石墨烯四氧化三铁颗粒表面的CTAB。本发明利用阳离子表面活性剂CTAB对G‑Fe3O4复合物进行改性,所得CTAB‑G‑Fe3O4复合材料表面充斥大量的正电荷,且具有高电位、超顺磁性和大比表面积等良好的性能,可以与带负电荷的病毒相互吸引,实现病毒的吸附和富集;利用所述病毒富集材料建立的病毒富集体系可分别富集诺如病毒、轮状病毒、腺病毒和新冠假病毒,且具有高富集效率。

技术领域

本发明涉及病毒富集与吸附技术领域,尤其涉及一种病毒富集材料及其制备方法和应用、病毒富集体系及其应用。

背景技术

食源性病毒通过污染食物进而感染人群,引发群体性肠胃炎疫情。食物中病毒的含量一般较低。例如,自然污染的贝类样品,其每克消化组织中仅含有102~104基因拷贝数的病毒。水环境和食物表面的病毒含量较低,不利于后续的核酸检测。因此,通常在检测之前要对病毒进行富集,以提高浓度,便于病毒的检测。

目前富集食源性病毒的方法有聚乙二醇(Polyethylene glycol,PEG)沉淀法、超速离心法、超滤法、免疫浓缩法和阳离子分离法。这些富集方法的目的在于从大量食物中分离病毒,并将其浓缩至体积较小的液体中,同时去除抑制检测的多糖、蛋白质和脂肪酸等物质,便于后续的核酸检测。

基于PEG可在中性高离子强度的缓冲液中使病毒沉淀的原理,PEG沉淀法被广泛用于从洗脱液中富集病毒。PEG沉淀法操作简单,只需将洗脱液的pH调至中性,并提高其离子强度,加入PEG后于4℃静置过夜,即可将病毒沉淀。有报道显示,将碱性洗脱和PEG沉淀富集法相结合可从食物表面回收5~90%的病毒,具体回收效率与食物的成分有关。目前,CEN/TC275/WG6/TAG4工作组已将碱性洗脱和PEG沉淀富集相结合作为从农产品和软水果中分离病毒的首选方法(David,LeesCEN,WG6,TAG4(2010)International Standardisation of aMethod for Detection of Human Pathogenic Viruses in Molluscan Shellfish.Foodand environmental virology 2(3):10.)。PEG沉淀法成本低廉、易于操作,已被广泛用于从洗脱液中沉淀病毒,但是一般需要沉降,耗费时间较长,还需要高速离心机等大型设备。

超速离心法常被用于从各类食物的洗脱液中浓缩病毒。在超速离心过程中,高达120000×g或235000×g的离心力可使洗脱液中病毒颗粒沉淀。但是,超速离心机设备昂贵,并且需要专业人员操作,也是导致这一富集方法难以被广泛应用的原因。

超滤法是根据洗脱液中不同组分分子量大小的差异对病毒进行浓缩的一种富集方法。液体和低分子量成分能够通过滤膜,而病毒可被捕获。超滤法能够去除分子检测方法的抑制成分,提高检测的灵敏度,但是在过滤前必须对病毒洗脱液进行纯化,避免食物残渣堵塞滤器。

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