[发明专利]可同时用于多种真菌毒素特异性识别的核酸适配体亲和整体柱及其制备方法

权利要求书

1.一种可同时用于多种真菌毒素特异性识别的核酸适配体亲和整体柱，其特征在于：所述亲和整体柱是将高亲水性有机聚合单体、多面体低聚倍半硅氧烷交联剂、丙烯酸酯交联剂、和包含抗真菌霉毒素核酸适配体水溶液的三元制孔剂、及光引发剂，基于光引发聚合，采用“一锅法”协同“巯基-烯”点击化学反应而直接将多种抗真菌毒素核酸适配体功能化修饰到整体柱上得到的亲和整体柱。

2.根据权利要求1所述的可同时用于多种真菌毒素特异性识别的核酸适配体亲和整体柱，其特征在于：所述高亲水性有机聚合单体为2-丙烯酰胺-2-甲基丙磺酸单体；所述多面体低聚倍半硅氧烷交联剂为甲基丙烯酸酯接支的多面体低聚倍半硅氧烷；所述丙烯酸酯交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯；所述光引发剂为安息香双甲醚。

3.根据权利要求1所述的可同时用于多种真菌毒素特异性识别的核酸适配体亲和整体柱，其特征在于：所述多种真菌毒素包括：赭曲霉毒素A、黄曲霉毒素B1以及玉米赤霉烯酮；所述抗赭曲霉毒素A的核酸适配体碱基序列为5'-SH-C6-GAT CGG GTG TGG GTG GCG TAAAGG GAG CAT CGG ACA-3'；所述抗黄曲霉毒素B1的核酸适配体碱基序列为5′-SH-C6-GTTGGG CAC GTG TTG TCT CTC TGT GTC TCG TGC CCT TCG CTA GGC CC-3′；所述抗玉米赤霉烯酮毒素的核酸适配体碱基序列为5′-SH-C6-TCA TCT ATC TAT GGT ACA TTA CTA TCTGTA ATG TGA TAT-3′。

4.一种如权利要求1-3任一项所述的可同时用于多种真菌毒素特异性识别的核酸适配体亲和整体柱的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1：分别将多种不同抗真菌毒素的巯基修饰的核酸适配体在10000r/min的转速下离心10min后，加水稀释后置于90℃恒温水浴锅中加热3min退火处理，自然冷却至室温得溶液a，将30μL 5mmol/L的三(2-羧乙基)膦加入到20μL溶液a中，室温下摇床孵育1h，混合形成多种核酸适配体混合储备液1；

S2：将多面体低聚倍半硅氧烷交联剂、丙烯酸酯交联剂、高亲水性有机聚合单体、光引发剂、致孔剂加入2mL离心管中振荡并稍加热，使其充分混匀，形成均一透明预聚溶液，取步骤S1得到的多种核酸适配体混合储备液1加入所述预聚溶液中，通过三元致孔剂溶解，室温下涡旋振荡10min，超声脱气20min，使其形成均匀的溶液2；

S3：将步骤S2得到的溶液2注入经烯基化硅烷试剂预处理好的透明石英毛细管中，两端密封后放入紫外交联仪内光照辐射反应7min，反应完成后将制备好的整体柱取出，连接至液相色谱溶剂高压泵，采用甲醇水溶液将柱内填料中残留试剂清洗干净，所述甲醇水溶液中甲醇与水的体积比为1:1；

S4：将pH为8.0的缓冲液通过高压输液泵通入步骤S3所制得的整体柱，于4℃环境中密封保存备用。

5.根据权利要求4所述的可同时用于多种真菌毒素特异性识别的核酸适配体亲和整体柱的制备方法，其特征在于：步骤S2中加入2mL离心管中的多面体低聚倍半硅氧烷交联剂、丙烯酸酯交联剂及高亲水性有机聚合单体的配比按质量百分数之和为100％计为：高亲水性有机聚合单体14.00％～14.50％、多面体低聚倍硅氧烷POSS试剂3.50％～4.00％、丙烯酸酯交联剂82.50％。

6.根据权利要求4所述的可同时用于多种真菌毒素特异性识别的核酸适配体亲和整体柱的制备方法，其特征在于：所述三元致孔剂为N,N-二甲基甲酰胺、聚乙二醇以及多种核酸适配体混合储备液1，其组成按质量分数计为：N,N-二甲基甲酰胺占84.25％～91.75％，聚乙二醇占4.25％，多种核酸适配体混合储备液1占4.00％～11.50％，以上各组分质量分数之和为100％。