[发明专利]一种靶向PRSS3的多肽类抑制剂的设计方法、多肽类抑制剂及其制备方法

权利要求书

1.一种靶向PRSS3的多肽类抑制剂的设计方法，其特征在于，采用如下步骤：

a.通过MOE软件或DS软件，分别定义配体即牛胰蛋白酶抑制剂变体与受体即PRSS3蛋白晶体，然后找出受体与配体之间相互作用的作用位点，同时，获得受体与配体之间相互作用力的类型、能量、氨基酸残基间的距离信息；

b.多肽类抑制剂的序列设计：依据牛胰蛋白酶抑制剂变体来源的模板肽T，设计一系列不同序列的多肽与PRSS3蛋白晶体进行对接；并突变了模板肽中的N-端序列氨基酸并对序列中Arg和Asp之间的氨基酸进行点突变，替换为Ser，Asn，Tyr，Gly，Leu氨基酸；

c.使用MOE软件或DS软件进行多肽类抑制剂的结构细化，采用LowMode MD法对多肽序列进行构象分析，然后再与PRSS3受体进行对接，综合多肽构象优化、分子对接和结合能量分析设计得到多肽类抑制剂WZ-2。

2.一种基于权利要求1所述的靶向PRSS3的多肽类抑制剂的设计方法得到的多肽类抑制剂WZ-2，其特征在于，氨基酸序列为PGPCRLDI，或插入、突变、缺失1～3个氨基酸的多肽序列或相关衍生物。

3.根据权利要求2所述的多肽类抑制剂WZ-2，其特征在于，结构如下：

所述的多肽类抑制剂WZ-2可以特异性识别肿瘤相关受体PRSS3，并具有抑制PRSS3活性的作用。

4.根据权利要求3所述的多肽类抑制剂WZ-2，其特征在于，在治疗肿瘤中的应用，所述肿瘤包括胆管癌、乳腺癌、卵巢癌、肝癌、宫颈鳞癌、肺腺癌和胰腺癌。

5.权利要求4所述的多肽类抑制剂WZ-2在治疗肿瘤中的应用，其特征在于，以多肽类抑制剂WZ-2为活性成分的药物制剂包括冻干粉针、注射液、片剂、脂质体、纳米制剂多种形式。

6.权利要求3的多肽类抑制剂WZ-2的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)采用Fmoc固相合成策略，按多肽类抑制剂WZ-2氨基酸排列序列，依次将Fmoc-Ile-Wang树脂与Fmoc-Asp(R₁)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Arg(R₂)-OH、Fmoc-Cys(R₃)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Pro-OH通过多肽偶联剂HOAt及DIC进行连接；

2)使用95％三氟乙酸水溶液将多肽类抑制剂WZ-2从Fmoc-Ile-Wang树脂上切割下来，再用甲基叔丁基醚沉淀，经HPLC进行纯化，冻干得到目标产物。

7.根据权利要求6所述的多肽类抑制剂WZ-2的制备方法，其特征在于：使用Fmoc-Ile-Wang树脂，键合量为0.30mmol/g，多肽偶联剂使用4倍当量的HOAt及DIC，偶联反应温度维持在10～30℃。

8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述的Fmoc-Asp(R₁)-OH、Fmoc-Arg(R₂)-OH、Fmoc-Cys(R₃)-OH的R₁、R₂、R₃为H、Trt、tBu、Boc、Pbf、OtBu中的任意一种。