[发明专利]一种核酸检测试剂盒、检测方法及应用

权利要求书

1.一种核酸检测试剂盒，其包括Cpf1检测体系，其特征在于，所述Cpf1检测体系包括：向导RNA、Cpf1蛋白、核酸探针和含锰离子的溶液；

所述Cpf1蛋白的氨基酸序列选自：

将如SEQ ID NO: 54所示的T152、G532和K538突变为R后的序列；或将如SEQ ID NO: 54所示的T152和G532突变为R后所示的序列；或将如SEQ ID NO: 55所示的E184、N607和K613突变为R后所示的序列；或将如SEQ ID NO: 55所示的E184和N607突变为R后所示的序列。

2.如权利要求1所述的核酸检测试剂盒，其特征在于，所述含锰离子的溶液为硫酸锰、氯化锰或醋酸锰溶液；

所述核酸探针为单链DNA探针；

所述Cpf1蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO. 41、40、35或34所示。

3.如权利要求2所述的核酸检测试剂盒，其特征在于，所述单链DNA探针包括荧光标记。

4.如权利要求3所述的核酸检测试剂盒，其特征在于，所述单链DNA探针在其5’端和3’端分别具有荧光基团和荧光淬灭基团。

5.如权利要求4所述的核酸检测试剂盒，其特征在于，所述单链DNA探针在其5’端具有荧光基团和3’端具有荧光淬灭基团。

6.如权利要求5所述的核酸检测试剂盒，其特征在于，所述荧光基团为6-FAM、TET、CY3、CY5或ROX，所述荧光淬灭基团为BHQ1、BHQ2或BHQ3。

7.如权利要求2所述的核酸检测试剂盒，其特征在于，所述单链DNA探针的序列为TTTATTT。

8.如权利要求1~7任一项所述的核酸检测试剂盒，其特征在于，所述向导RNA为引导Cpf1蛋白特异性结合所述核酸的RNA。

9.如权利要求8所述的核酸检测试剂盒，其特征在于，所述向导RNA为crRNA；所述crRNA为检测病毒核酸的crRNA。

10.如权利要求9所述的核酸检测试剂盒，其特征在于，所述crRNA为检测SARS相关冠状病毒或MERS-CoV病毒的crRNA。

11.如权利要求10所述的核酸检测试剂盒，其特征在于，所述SARS相关冠状病毒为冠状病毒SARS-CoV或SARS-CoV-2。

12.如权利要求9所述的核酸检测试剂盒，其特征在于，所述crRNA为检测SARS-CoV病毒orf1ab基因的crRNA、检测MERS-CoV病毒orf1a基因的crRNA、检测MERS-CoV病毒upE基因的crRNA、检测SARS-CoV-2病毒E基因的crRNA、检测SARS-CoV-2病毒S基因的crRNA、检测SARS-CoV-2病毒M基因的crRNA和/或检测SARS-CoV-2病毒N基因的crRNA，所述orf1ab基因的核苷酸序列如SEQ ID NO: 11所示，所述orf1a基因的核苷酸序列如SEQ ID NO: 12所示，所述upE基因的核苷酸序列如SEQ ID NO: 13所示，所述E基因的核苷酸序列如SEQ ID NO: 46所示；所述SARS-CoV-2-S基因的核苷酸序列如SEQ ID NO: 79所示；所述SARS-CoV-2-M基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:80所示；所述SARS-CoV-2-N基因的核苷酸序列如SEQ ID NO: 81所示。

13.如权利要求12所述的核酸检测试剂盒，其特征在于，所述crRNA的核苷酸序列如SEQID NO: 1-10、SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO:48和SEQ ID NO: 53、SEQ ID NO: 56-72中的一个或多个所示。