[发明专利]盐芥盐诱导表达基因TsHKT1;2启动子的克隆与应用

说明书

本发明公开了一种盐芥盐诱导表达基因TsHKT1；2启动子的克隆与应用；本发明通过构建该启动子驱动GUS的植物表达载体TsHKT1；2::GUS，并经农杆菌花序侵染法转化拟南芥，对转基因拟南芥进行染色观察。结果表明，TsHKT1；2在拟南芥苗期叶维管束组织中微弱表达，成熟期也主要在莲座叶维管束中表达。此外，对盐芥各组织的相对荧光定量PCR结果表明，TsHKT1；2基因表达受盐诱导上调，并且在各组织中表达量较高。因此，该启动子是一种较为稳定的盐芥盐诱导上调启动子，可以在植物基因改造工程中作为功能元件驱动相关功能基因的表达，可能在盐胁迫过程中的作用最为关键。

技术领域

本发明属于分子生物学和植物基因工程领域，涉及一种盐芥盐诱导表达基因TsHKT1；2启动子的克隆与应用；尤其涉及一种盐芥盐诱导表达上调TsHKT1；2基因的启动子核苷酸编码序列的克隆，此启动子重组表达载体的构建，以及转入双子叶植物拟南芥中启动下游基因表达的方法。

背景技术

土壤盐渍化是植物承受的最主要的环境胁迫之一，严重制约植物的生长，使得农作物的产量严重降低，危害国家的粮食安全。为了抵御土壤中盐离子的胁迫，植物体内产生了一系列的盐胁迫调控机制来适应环境。因此，了解植物如何响应外界盐胁迫的过程是十分重要的。HKT1类型的转运蛋白在植物盐胁迫过程中发挥了重要的作用。在模式植物拟南芥中，只存在一个HKT1类型的基因，即AtHKT1。而在盐生植物，也是拟南芥的近亲物种盐芥中，却存在着三个HKT1基因，分别是TsHKT1；1，TsHKT1；2， TsHKT1；3。研究这三个基因的功能和表达谱对于解析植物响应盐胁迫的过程是十分重要的。本发明主要针对TsHKT1；2的启动子进行分析。

常见的启动子可分为组成型启动子，组织特异型启动子和诱导型启动子。在一些情况下，一种类型的启动子可能兼有其他类型启动子的特性。诱导型启动子在植物基因工程中具有重要的功能，植物通过启动不同基因的表达可在一定范围内适应光、温、水等环境的变化。这些基因的启动子通常包含比较保守的顺式作用元件，利用这些保守元件可以推测新基因的可能功能，也可用这些环境应答基因的启动子与抗逆基因融合，从而使转基因植物更好地适应逆境。

发明内容

本发明的目的是针对目前的研究现状，提供一种盐芥盐诱导表达基因TsHKT1；2启动子的克隆方法与应用。

为完成上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明涉及一种盐芥盐诱导表达基因TsHKT1；2，所述基因核苷酸序列如SEQ.ID.NO:1所示。

本发明还涉及一种盐芥盐诱导表达基因TsHKT1；2启动子，所述启动子核苷酸序列如SEQ.ID.NO:2所示。

本发明还涉及一种含有所述TsHKT1；2启动子的重组表达载体。

优选地，所述重组表达载体为在植物GUS表达载体pCambia1305.1的酶切位点插入所述TsHKT1；2启动子得到的重组质粒；在所述重组表达质粒中，TsHKT1；2启动子连接在GUS基因的上游。

优选地，所述酶切位点为BamHⅠ和BglⅡ。

优选地，所述插入采用的扩增引物为：

FP2:TTCGAGCTCGGTACCCGGGGATCCGCGTTTGTCAAACTCGATTGG

RP2:AAATTTACCCTCAGATCTGGAGAGATTTAGCATGTTGCGA。

本发明还涉及一种所述的TsHKT1；2启动子作为盐芥盐诱导上调启动子在植物基因改造工程中驱动目的基因表达的应用。

优选地，所述植物包括拟南芥。