[发明专利]利用CRISPR/Cas9系统同时敲除橡胶草1-SST和1-FFT基因的方法有效
| 申请号： | 202011140720.X | 申请日： | 2020-10-22 |
| 公开（公告）号： | CN112266913B | 公开（公告）日： | 2022-08-02 |
| 发明（设计）人： | 覃碧;刘实忠;王锋;张立群;杨玉双;聂秋海;张继川;王肖肖 | 申请（专利权）人： | 中国热带农业科学院橡胶研究所;北京玲珑蒲公英科技发展有限公司;北京化工大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/82;C12N15/65;A01H5/06;A01H6/00 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 商秀玲 |
| 地址： | 571101 *** | 国省代码： | 海南;46 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 利用 crispr cas9 系统 同时 橡胶 sst fft 基因 方法 | ||
1.利用CRISPR/Cas9系统同时靶向敲除橡胶草菊糖合成酶基因1-SST和1-FFT的载体，其特征在于，所述载体包含sgRNA的表达盒，所述表达盒包含用于驱动所述sgRNA转录的启动子和sgRNA，
所述sgRNA包括靶向1-SST基因的sgRNA-SST1和sgRNA-SST2以及靶向1-FFT基因的sgRNA-FFT1和sgRNA-FFT2；sgRNA-SST1、sgRNA-SST2、sgRNA-FFT1和sgRNA-FFT2的序列依次如SEQ ID NO.1-4所示；
所述载体的序列如SEQ ID NO.6所示。
2.包含权利要求1所述的载体的宿主细胞。
3.权利要求1所述的载体或权利要求2所述的宿主细胞在提高橡胶草根部的蔗糖、果糖或天然橡胶含量，或者在降低橡胶草根部的菊糖含量中的应用。
4.权利要求1所述的载体或权利要求2所述的宿主细胞在橡胶草遗传育种或种质资源改良中的应用；
所述应用为选育橡胶草菊糖合成缺陷型种质或高产天然橡胶种质。
5.一种利用CRISPR/Cas9系统同时靶向敲除橡胶草菊糖合成酶基因1-SST和1-FFT的方法，其特征在于，将权利要求1所述的载体转入橡胶草中，经筛选获得菊糖合成酶基因1-SST和1-FFT同时敲除的橡胶草植株。
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