[发明专利]一种荧光探针及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种荧光探针，其特征在于，该探针的结构式为：

。

2.权利要求1所述的一种荧光探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1，将7-羟基香豆素-3-羧酸和2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯加到耐压瓶中，抽真空通氮气，加入超干DMF，冰水浴搅拌均匀后，在氮气氛围下，加入1-(4-氨基苯)-1,2,2-三苯乙烯和N,N-二异丙基乙胺（DIEA），再次搅拌，将蒸馏水加到耐压瓶中，用乙酸乙酯萃取耐压瓶中的反应液，之后水洗乙酸乙酯以除去少量的DMF，用无水硫酸钠干燥乙酸乙酯，旋除乙酸乙酯，经柱色谱分离得到黄色固体化合物1，即7-羟基-2-氧代-N-（4-（1,2,2-三苯基乙烯基）苯基）-2H-色烯-3-羧酰胺；

步骤2，将四丁基硫酸氢铵和K₂CO₃溶于5 mL水中，再将步骤1所得化合物7-羟基-2-氧代-N-（4-（1,2,2-三苯基乙烯基）苯基）-2H-色烯-3-羧酰胺和2 ,3 ,4 ,6-四乙酰氧基-alpha-D-吡喃糖溴化物溶于5 mL氯仿，然后依次将所得水溶液和氯仿溶液加入圆底烧瓶中，进行搅拌反应，反应结束后，加入二氯甲烷进行稀释，并用水洗，用无水硫酸钠干燥，旋除二氯甲烷，经柱色谱分离得到黄色固体化合物2，即2-氧代-7-（（2 ,3 ,4 ,6-四乙酰氧基-（alpha-D-吡喃半乳糖基））氧基）-N-（4-（ 1,2,2-三苯基乙烯基）苯基）-2H-色烯-3-羧酰胺；

步骤3，将CH₃ONa的甲醇溶液加入步骤2所得化合物2-氧代-7-（（2 ,3 ,4 ,6-四乙酰氧基-（alpha-D-吡喃半乳糖基））氧基）-N-（4-（ 1,2,2-三苯基乙烯基）苯基）-2H-色烯-3-羧酰胺的甲醇溶液中，进行搅拌反应，反应结束后，旋除溶剂，用正己烷洗涤固体，干燥，得到黄色固体化合物3，即2-氧代-7-（（β-D-吡喃半乳糖基）氧基）-N-（4-（ 1,2,2-三苯基乙烯基）苯基）-2H-色烯-3-羧酰胺。

3.根据权利要求2一种荧光探针的制备方法，其特征在于：所述步骤1中的7-羟基香豆素-3-羧酸的用量为206.2 mg，2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯的用量为570.4 mg，超干DMF的用量为2 mL，1-(4-氨基苯)-1,2,2-三苯乙烯的用量为347.5mg ，N,N-二异丙基乙胺（DIEA）的用量为387.8 mg，蒸馏水的用量为50 mL。

4.根据权利要求2一种荧光探针的制备方法，其特征在于：所述步骤1中通氮气的次数为3次，搅拌时间为0.5 h，再次搅拌温度为室温，搅拌时间过夜，萃取次数为3次，柱色谱分离用二氯甲烷:乙酸乙酯= 50:1过柱。

5.根据权利要求2一种荧光探针的制备方法，其特征在于：所述步骤2中的四丁基硫酸氢铵的用量为67.9 mg，K₂CO₃的用量为55.3 mg，化合物7-羟基-2-氧代-N-（4-（1,2,2-三苯基乙烯基）苯基）-2H-色烯-3-羧酰胺的用量为107.1 mg，2 ,3 ,4 ,6-四乙酰氧基-alpha-D-吡喃糖溴化物的用量为164.5 mg，二氯甲烷的用量为50 mL。

6.根据权利要求2一种荧光探针的制备方法，其特征在于：所述步骤2中搅拌反应的温度为室温，搅拌反应的时间为24 h，水洗次数为3次，柱色谱分离用石油醚:乙酸乙酯= 4:1过柱。

7.根据权利要求2一种荧光探针的制备方法，其特征在于：所述步骤3中的CH₃ONa的甲醇溶液的浓度为0.03 mol/L，用量为2 mL，化合物2-氧代-7-（（2 ,3 ,4 ,6-四乙酰氧基-（alpha-D-吡喃半乳糖基））氧基）-N-（4-（ 1,2,2-三苯基乙烯基）苯基）-2H-色烯-3-羧酰胺的甲醇溶液的浓度为0.012mol/L，用量为5mL，搅拌反应的温度为室温，搅拌反应的时间为1h。