[发明专利]一种利用纳米银-蔗糖转化酶复合物的细菌检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种利用纳米银-蔗糖转化酶复合物的非疾病诊断领域的细菌检测方法，其特征在于包括以下步骤：将纳米银溶液、待测液体、蔗糖转化酶混合反应后，加入蔗糖溶液进行反应，检测反应体系中的葡萄糖含量;

所述纳米银溶液的制备过程如下：取65 mg柠檬酸钠和2 mg单宁酸与50 mL水混合，煮沸并剧烈搅拌，再加入1 mL的4.2 mg/mL硝酸银，搅拌20 min，停止加热；待溶液冷却后，取其1mL以4℃，10000 rpm离心40 min，用超纯水洗涤2次，并将OD₄₀₀调至1，再从中取200 µL与100 µL不同浓度的聚乙烯亚胺溶液混合，室温下以400 rpm搅拌1 h；再以4℃，10000 rpm的条件离心40 min，弃上清，去除残留PEI，加入超纯水，调节至OD₄₀₀=1；

所述聚乙烯亚胺溶液的浓度为0-0.1 mg/mL、0.3 mg/mL或1 mg/mL。

2.根据权利要求1所述的利用纳米银-蔗糖转化酶复合物的非疾病诊断领域的细菌检测方法，其特征在于：加入蔗糖溶液后反应时间为10-20min，反应温度为50-60℃，pH为4.5-5.5。

3.根据权利要求2所述的利用纳米银-蔗糖转化酶复合物的非疾病诊断领域的细菌检测方法，其特征在于：加入蔗糖溶液后反应时间为15min，反应温度为55℃，pH为5。

4.根据权利要求3所述的利用纳米银-蔗糖转化酶复合物的非疾病诊断领域的细菌检测方法，其特征在于：该方法用于检测大肠杆菌，大肠杆菌线性检测范围为10² cfu/mL-10⁷cfu/mL。

5.根据权利要求3所述的利用纳米银-蔗糖转化酶复合物的非疾病诊断领域的细菌检测方法，其特征在于：该方法用于检测金黄色葡萄球菌，金黄色葡萄球菌线性检测范围为10³ cfu/mL-10⁷ cfu/mL。

6.根据权利要求1-5任一项所述的利用纳米银-蔗糖转化酶复合物的非疾病诊断领域的细菌检测方法，其特征在于：通过血糖仪检测反应体系中的葡萄糖含量。

7.一种细菌检测试剂盒，其特征在于：包括纳米银溶液、蔗糖转化酶;

所述纳米银溶液的制备过程如下：将取65 mg柠檬酸钠和2 mg单宁酸与50 mL水混合，煮沸并剧烈搅拌，再加入1 mL的4.2 mg/mL硝酸银，搅拌20 min，停止加热；待溶液冷却后，取其1mL以4℃，10000 rpm离心40 min，用超纯水洗涤2次，并将OD₄₀₀调至1，再从中取200 µL与100 µL不同浓度的聚乙烯亚胺溶液混合，室温下以400 rpm搅拌1 h；再以4℃，10000 rpm的条件离心40 min，弃上清，去除残留PEI，加入超纯水，调节至OD₄₀₀=1；

所述聚乙烯亚胺溶液的浓度为0-0.1 mg/mL、0.3 mg/mL或1 mg/mL。