[发明专利]一种艾地骨化醇血药浓度的高效液相色谱-质谱联用检测方法

说明书

本发明涉及一种艾地骨化醇血药浓度的高效液相色谱‑质谱联用检测方法，属于药物分析领域。本发明所述方法如下：待测血浆前处理步骤：向待测血浆中加入内标液，再加入萃取剂涡旋、离心，然后取上清液浓缩至干，最后再复溶；待测血浆液质联用检测步骤：采用液质联用系统进行分析检测，色谱柱为C18色谱柱，流动相为：流动相A为挥发性铵盐的水溶液，流动相B为挥发性铵盐的甲醇溶液，洗脱方式为梯度洗脱，离子源类型为大气压化学电离源，电离方式为正离子，检测模式多反应监测。本发明采用液质联用方法对待测血浆中艾地骨化醇的浓度进行检测，不但显著地将检测下限提升至5pg/mL，为C_max的1/20，完全满足了生物样本的检测需求。

技术领域

本发明涉及一种艾地骨化醇血药浓度的高效液相色谱-质谱联用检测方法，属于药物分析领域。

背景技术

2012年，卫生部发布的《防治骨质疏松知识要点》指出：骨质疏松症是我国排名第4位的慢性疾病，也是中老年最常见的骨骼疾病。据国际骨质疏松基金会(IOF)统计，2020年，仅我国内地将有2.86亿人患骨密度过低或骨质疏松症，到2050年这一数字将上升到5.33亿人，且全球治疗骨质疏松症所产生的费用可高达1315亿美元。

艾地骨化醇由日本中外制药株式会社研发，规格为0.75μg和0.5μg，于2011年1月21日在厚生省获批上市，是继阿法骨化醇后又一新的用于治疗骨质疏松症的维生素D3类药物，具有改善骨代谢和促进骨吸收的双重作用。一项由1054例骨质疏松症患者参加历时3年的Ⅲ期临床试验数据表明，艾地骨化醇疗效优于阿法骨化醇，且安全性与阿法骨化醇相似，具有较好的应用前景。

艾地骨化醇作为最新一代抗骨质疏松类药物，安全性较高，不良反应较少、顺应性良好、用药限制少、与经CYP酶系统代谢的药物间很少产生相互作用，具有良好的市场前景。

然而，艾地骨化醇血药浓度的检测方法却鲜有报道。

中外制药株式会社曾公开报道健康成年男性单次口服给药0.75μg艾地骨化醇时，在投药后3.4±1.2小时内血清中艾地骨化醇浓度达到给药后血药浓度的最高值，即C_max为99.8±12.7pg/mL。按照《化学药物制剂生物利用度和生物等效性研究技术指导原则》的要求，一般检测方法的定量下限应满足为C_max的1/10-1/20。中外制药株式会社采用LC-MS/MS方法分析血清中艾地骨化醇的浓度，该方法的定量下限为0.025ng/mL，即25pg/mL，约为C_max的1/4，不能完全满足生物样本定量分析方法的要求。

专利CN111272902A公开了一种艾地骨化醇血药浓度的检测方法，所述方法的定量下限为10pg/mL，不到C_max的1/10，亦不能完全满足生物样本定量分析方法的要求。且所述方法采用的流动相A为不挥发性乙酸锂水溶液，易造成质谱的污染，需频繁清洗，不但会影响仪器寿命还会降低工作效率，影响产出。此外，所述方法采用价格昂贵的API6500+质谱仪作为检测仪器，无形中增加了企业经济负担，不利于检测技术的推广应用。

由于临床药代动力学检测时样本量常常很大，因此需要一种快速、灵敏且能完全满足生物样本定量分析要求的分析方法。

发明内容

本发明为检测艾地骨化醇血药浓度建立了一种新方法，该方法检测下限为5pg/mL，是C_max的1/20，完全能够满足生物样本定量分析的要求，解决了上述的问题。

本发明提供了一种艾地骨化醇血药浓度的高效液相色谱-质谱联用检测方法，所述方法包括如下步骤：待测血浆前处理步骤：向待测血浆中加入内标液，再加入萃取剂涡旋、离心，然后取上清液浓缩至干，最后再复溶；待测血浆液质联用检测步骤：采用液质联用系统进行分析检测；色谱柱为：C18色谱柱；流动相为：流动相A为挥发性铵盐的水溶液，流动相B为挥发性铵盐的甲醇溶液；洗脱方式为：梯度洗脱，梯度洗脱程序如下表1所示：