[发明专利]一种复合酶辅助超声提取刺五加总黄酮的方法

说明书

本发明提供一种复合酶辅助超声提取刺五加总黄酮的方法，包括以下步骤：(1)取刺五加茎皮，干燥、粉碎、过筛，于4℃密封备用；(2)取刺五加干粉，按料液比1:10加入pH为5～6.6的柠檬酸柠檬酸钠缓冲溶液，浸泡，然后在45～60℃条件下加入50U/g复合酶酶解，复合酶中纤维素酶与果胶酶的酶活比为1～4：2；(3)酶解结束后，按料液比1:10加入无水乙醇，超声提取；(4)提取结束后，冷却、过滤，所得滤液即为所得刺五加提取物。本发明方法操作简便，与传统水提取法等相比，黄酮提取率可提高10％左右。

技术领域

本发明属于中药提取技术领域，具体的涉及一种复合酶辅助超声提取刺五加总黄酮的方法。

背景技术

刺五加(Acanthopanax senticocus Harms)为五加科植物，野生资源丰富，全株均可入药。刺五加富含多种活性成分，主要有苷类、多糖、黄酮、木脂素和酚酸等。借助中药分子机制综合数据库(Traditional Chinese Medicines Integrated Database,TCMID)，共检索到39种刺五加成分，从专业化学数据库中得到66种刺五加化学成分，同时通过查阅大量文献，共检索到241种刺五加化学成分。大量临床试验研究表明:刺五加具有保护心脑血管、抗肿瘤、治疗糖尿病、抗疲劳、调节神经系统等作用。随着国内外对中药活性成分研究的兴起,黄酮类化合物倍受科研人员的关注。黄酮类化合物属植物次生代谢产物，也称为维生素P，是广泛存在于自然界中的属于有机结构的化合物。大量的研究表明，黄酮类化合物具有抗自由基、抗菌、抗病毒、抗癌、抗氧化、抗衰老等药理作用。不同植物中所含黄酮类化合物种类不尽相同，因此，黄酮类化合物提取工艺研究就显得至关重要。

现有技术中，提取刺五加总黄酮的方法有超声波提取、乙醇回流法、罐组式逆流提取、传统水提法、超高压法、机械化学法、微波法。如中国专利文献CN110721210A(CN2019-11095335.5)提供一种刺五加茎皮黄酮提取工艺及其应用，首次提出对刺五加茎皮部位的黄酮进行超声波辅助乙醇提取工艺，并提供了一套能够较大程度从刺五加茎皮中提取黄酮的工艺，具体为：乙醇浓度50％，提取时间65min，液料比40mL/g，提取温度65℃，吐温80浓度1.8％(体积分数)，提取功率300W的超声波提取工艺，优化后的黄酮提取率为24.75mg/g。但是，超声波提取真正应用与工业时将振子密封于不锈钢盒中，投入罐的中央，一方面不锈钢盒无法太大，否则装配、密封和维修都难以解决，另一方面太小功率达不到，超声波的作用就微乎其微，难以达到应有的效果。

中国专利文献CN1813834A(CN200610016616.3)公开一种治疗脑中风的刺五加叶总黄酮提取物的制备方法。将刺五加叶经除杂，碎断，置于提取罐中，加40％～95％乙醇回流提取2～4次，每次1～3小时，每次加乙醇的体积量L∶刺五加叶重量Kg为6～12∶1，提取液合并，浓缩，滤过，加入已处理好的聚酰胺柱中，以水洗脱至流出液近无色，再以10％～30％乙醇洗脱至流出液淡黄色，弃去上述洗脱液，再以40％～70％乙醇洗脱，收集洗脱液至流出液淡黄色，回收乙醇并浓缩，喷雾干燥，即得本发明的刺五加叶总黄酮提取物。以金丝桃苷计，总黄酮含量为50％～99％。但是，采用回流提取的工艺研究耗费时间太长、且提取效果不佳。

发明内容

为了解决现有技术中存在的提取时间长、提取过程易破坏黄酮本身的生物活性、黄酮取率低等问题，本发明提供一种复合酶辅助超声提取刺五加总黄酮的方法。并且通过得到了适合刺五加中总黄酮提取的纤维素酶，该纤维素酶来源于长柄木霉，与来源于里氏木霉的纤维素酶相比，其提取效率更高。为刺五加总黄酮的高效提取技术提供依据，同时促进刺五加总黄酮为主要原料的食品、药品的开发和刺五加产业的经济效益。