[发明专利]检测鸭疫里默氏杆菌抗体的ELISA方法及其试剂盒和应用有效
申请号: | 202011143764.8 | 申请日: | 2020-10-23 |
公开(公告)号: | CN112180087B | 公开(公告)日: | 2022-06-14 |
发明(设计)人: | 周祺;麦凯杰;杨德鸿;罗翠芬;严专强;周庆丰;陈丽 | 申请(专利权)人: | 温氏食品集团股份有限公司 |
主分类号: | G01N33/569 | 分类号: | G01N33/569;G01N33/543;G01N33/58 |
代理公司: | 广州文智专利代理事务所(特殊普通合伙) 44469 | 代理人: | 梁媛 |
地址: | 527499 广东*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 检测 鸭疫里默氏 杆菌 抗体 elisa 方法 及其 试剂盒 应用 | ||
1.检测鸭疫里默氏杆菌抗体的ELISA方法,其中,所述ELISA方法的包被抗原为重组OmpA蛋白,所述的重组OmpA蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO:1所示序列;所述重组OmpA蛋白核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示序列;所述的方法不用于疾病的诊断和治疗。
2.根据权利要求1所述的检测鸭疫里默氏杆菌抗体的ELISA方法,其中,所述的重组OmpA蛋白的基因序列PCR扩增引物如SEQ ID NO:3及SEQ ID NO:4所示。
3.根据权利要求1或2所述的检测鸭疫里默氏杆菌抗体的ELISA方法,其中,所述ELISA方法包括如下步骤:
1)用重组OmpA蛋白作为包被抗原;
2)将包被抗原放入酶标板内进行包被、封闭,得封闭液;
3)甩掉步骤2)中封闭液,用一抗孵育,然后再用二抗孵育;
4)甩掉步骤3)中二抗孵育液,采用TMB显色液显色,加入显色终止液,终止反应;
5)利用酶标仪测定步骤4)酶标板孔中液体OD450nm值,根据OD450nm临界值判定阴、阳性。
4.根据权利要求3所述的检测鸭疫里默氏杆菌抗体的ELISA方法,其中,所述的OD450nm临界值为0.4855。
5.根据权利要求4所述的检测鸭疫里默氏杆菌抗体的ELISA方法,其中所述的包被抗原的包被浓度为2.5μg/mL。
6.检测鸭疫里默氏杆菌抗体的ELISA试剂盒,其中,所述试剂盒的包被抗原为权利要求1或2所述的重组OmpA蛋白。
7.权利要求6所述的ELISA试剂盒在检测鸭疫里默氏杆菌抗体中的应用,其中,所述的应用不涉及疾病的诊断和治疗。
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