[发明专利]调控植物对菌核病抗病性的新型基因及其应用

权利要求书

1.一种防治植物菌核病的方法，包括：

(a)下调植物中miR319a或其前体的表达或活性；或

(b)调节植物中miR319a-TCP4-WRKY-JA/SA信号通路，促进TCP4-WRKY-JA/SA介导的免疫作用。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，(a)中，包括：在植物中敲除或沉默miR319a或其前体，抑制miR319a的活性；较佳地，包括：以特异性干扰miR319a或其前体的干扰分子来沉默miR319a或其前体，以CRISPR系统进行基因编辑从而敲除miR319a或其前体，以同源重组的方法敲除miR319a或其前体，或在含有miR319a或其前体的植物中将miR319a或其前体进行功能丧失性突变。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，(b)中，包括：

抑制miR319a与TCP4的结合；

上调TCP4的表达或活性；和/或

促进TCP4与WRKY启动子的结合、促进WRKY的转录激活。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，(b)中，包括：

在植物中引入TCP4的上调剂，从而提高植物中TCP4的表达或活性；较佳地，所述上调剂包括编码TCP4的多核苷酸或构建物；或

对TCP4的miR319a结合区域进行突变，阻止miR319a与TCP4的结合；较佳地，将miR319a与TCP4结合区域的第10位突变为U，第12位突变为G，第15～18位突变为AAGU；或

在WRKY启动子区引入TCP4结合位点；较佳地所述TCP4结合位点为CATATG；较佳地通过基因编辑或定点突变引入所述TCP4结合位点。

5.如权利要求1所述，其特征在于，所述的促进TCP4-WRKY-JA/SA介导的免疫作用包括：通过促进PR2，PR3和PDF1.2b的表达而促进免疫作用。

6.一种miR319a或其前体的下调剂的用途，用于防治植物菌核病，或用于制备防治植物菌核病的制剂；较佳地，所述的下调剂包括：敲除或沉默miR319a或其前体的试剂，抑制miR319a活性的试剂；较佳地，包括：特异性干扰miR319a或其前体表达的干扰分子，针对miR319a或其前体的CRISPR基因编辑试剂、同源重组试剂或定点突变试剂，所述定点突变试剂将miR319a或其前体进行功能丧失性突变。

7.调节植物中miR319a-TCP4-WRKY-JA/SA信号通路的调节剂的用途，用于防治植物菌核病，或用于制备防治植物菌核病的制剂；其中，所述调节剂包括：

TCP4的上调剂，其可提高植物中TCP4的表达或活性；较佳地，所述上调剂包括编码TCP4的多核苷酸或构建物；或

TCP4的miR319a结合区域进行突变的试剂，其阻止miR319a与TCP4的结合；较佳地，将miR319a与TCP4结合区域的第10位突变为U，第12位突变为G，第15～18位突变为AAGU；或

在WRKY启动子区引入TCP4结合位点的试剂；较佳地所述试剂为基因编辑或定点突变试剂；较佳地所述TCP4结合位点为CATATG。

8.如权利要求1～7任一所述，其特征在于，所述的植物是表达miR319a、TCP4、WRKY或其同源物的植物，或具有miR319a-TCP4-WRKY-JA/SA信号通路的植物；较佳地，所述的植物包括：十字花科植物，禾本科植物；或

所述的WRKY为启动子区包括CATATG序列的WRKY；较佳地包括：WRKY70，WRKY33或WRKY75。

9.一种TCP4的突变体，其miR319a结合区域发生突变，所述突变包括：miR319a与TCP4结合区域的第10位突变为U，第12位突变为G，第15～18位突变为AAGU。