[发明专利]一种羟基-α-山椒素单体的制备方法

说明书

本发明提供了一种羟基‑α‑山椒素单体的制备方法，属于天然药物提取分离技术领域。该制备方法包括如下步骤：(1)用低级醇浸提得花椒提取物总浸膏；(2)采用乙酸乙酯萃取后柱层析富集羟基山椒素混合物；(3)采用冷冻结晶法去除杂质，富集羟基‑α‑山椒素；(4)对于羟基‑α‑山椒素分离纯化。本发明羟基‑α‑山椒素单体的制备方法操作简便，对操作人员技术要求低；制备过程中条件温和，即保证了羟基‑α‑山椒素的稳定性，又十分安全；同时，该制备方法制得的羟基‑α‑山椒素单体纯度高，制备得到的羟基‑α‑山椒素单体纯度可达99％以上，可作为羟基‑α‑山椒素单体标准品。本发明制备方法成本低、适合大规模工业化推广，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于天然药物提取分离技术领域，具体涉及一种羟基-α-山椒素单体的制备方法。

背景技术

花椒(Zanthoxylum L.)，芸香科(Rutaceae)花椒属植物，作为我国传统的调味品及中药材有着非常悠久的历史，其果实具有浓郁的香气和辛麻味，兼具“镇膻解腥”的作用，是我国的“八大调味品”之一。辛麻味是花椒最主要的风味特征，也是评价其品质优劣的最重要指标。此外花椒也是我国常用中药，具有温中止痛，抗菌杀虫的作用，可用于治疗呕吐、腹泻、蛔虫病等疾病，另外还具有镇痛、抗炎、抑菌、抗衰老等作用。

在花椒的应用中，最主要的仍然是它的风味，花椒中不饱和脂肪酰胺类化合物是花椒辛麻味的主要来源。这些物质主要包括α-山椒素、β-山椒素、γ-山椒素、羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素、羟基-γ-山椒素和羟基-ε-山椒素等三十余种。其中以下式所示的羟基-α-山椒素(1)和羟基-β-山椒素(2)含量最高，是花椒属植物中特异性含有的活性成分。其中，羟基-α-山椒素具有强烈的麻刺感和麻木感，是花椒产生麻味作用机制最主要的活性化合物。

由于花椒中的羟基山椒素类化合物结构极为相似，多为顺反异构体，因此，从中提取、分离纯化得到高纯度单体的难度极大。专利CN 103099163A仅得到羟基山椒素的混合物。CN 105481711A公开了一种羟基-β-山椒素单体的制备方法，但没有公开如何制备羟基-α-山椒素单体。CN106977416A公开了一种经过紫外照射和正己烷萃取制备羟基-α-山椒素的方法，但该方法需要进行紫外照射，羟基-α-山椒素很不稳定，光照或者室温放置都极易发生变化。其他的有关花椒麻味物质的提取制备方法如利用超临界CO₂萃取、TLC薄层等方法，只能得到混合的羟基山椒素。可用作标准品的单体也仅有羟基-β-山椒素单体。而高纯度、高收率的羟基-α-山椒素单体的制备仍是空白，导致花椒麻味物质检测的标准品单一，在很大程度上限制了花椒的研究及应用。

发明内容

为了解决以上问题，本发明提供一种可用作标准品的高纯度羟基-α-山椒素单体的高效制备方法。

本发明提供了一种羟基-α-山椒素单体的制备方法，它包括如下步骤：

(1)花椒提取物总浸膏的制备：用低级醇作为提取溶剂对花椒进行浸提，得浸提液，将浸提液减压浓缩，得花椒提取物总浸膏；

(2)羟基山椒素混合物的富集：将步骤(1)所得的花椒提取物总浸膏用水稀释，采用乙酸乙酯进行萃取，收集乙酸乙酯萃取液，减压浓缩得山椒素混合物浸膏，将山椒素混合物浸膏经过柱层析，收集洗脱液浓缩得羟基山椒素混合物浸膏；

(3)羟基-α-山椒素的富集：将步骤(2)所得的羟基山椒素混合物浸膏溶于有机溶剂中，冷冻结晶，过滤收集羟基山椒素混合物母液；

(4)羟基-α-山椒素的分离纯化：将步骤(3)所得的羟基山椒素混合物母液经过RP-18反相硅胶柱层析，用丙酮水溶液洗脱，得羟基-α-山椒素单体丙酮水溶液，加入NaCl至不再有沉淀析出，过滤，滤液减压浓缩后通过非极性聚苯乙烯型大孔吸附树脂柱层析得到羟基-α-山椒素溶液，减压浓缩，干燥即得。

进一步地，