[发明专利]一种鸦胆子油乳浊液及其在抑制乙肝病毒方面的应用

说明书

本发明属于生物学领域，涉及一种鸦胆子油乳浊液及其在抑制乙肝病毒方面的应用，提供了鸭胆子油乳浊液的制备方法，以及其在乙肝病毒的抑制应用。本发明利用鸭胆子油对免疫调节分子的显著性促进作用，对乙肝病毒形成靶向性抑制效果，从复制、表面抗原和e抗原角度实现稳定的抑制，增加其实用性。

技术领域

本发明属于生物学领域，具体涉及一种鸦胆子油乳浊液及其在抑制乙肝病毒方面的应用。

背景技术

乙肝病毒感染是导致慢性肝炎、肝硬化、肝细胞癌的重要原因，严重威胁人类健康。近年来，核苷类似物抗HBV的研究进展迅速，临床上抑制HBV有确切的疗效，耐药性突变的产生是目前此类药物的主要问题。可选择药物的增加对耐药问题有一定帮助，但该类药物只能抑制HBV复制，对共价闭合环状DNA无效，无法彻底清除、治愈HBV。目前尚无有效清除cccDNA的药物和方法。探索可彻底清除HBV的治疗策略意义重大。

HBV在全球及我国流行和发病情况。全球约一半人口处于HBV高发区，20亿人曾感染HBV，约3.5亿为慢性感染者，每年约100万死于HBV感染，位列全球十大致死疾病第七位。我国1至59岁人群表面抗原携带率为7.18％，慢性感染者约9300万人，其中仅18.6％得到诊断，4.1％接受过治疗。HBV隐秘感染现象非常普遍，亚洲人群中高达7.5-16％。我国HBV疫苗覆盖率90％以上，母婴成功阻断率高达95％，感染人数明显下降，但2017年仍有100万新发感染。2016年世卫组织首次提出2030年前全球范围消除病毒性肝炎的远大目标。我国HBV感染率高、基数大、治疗率低、治疗效果欠佳，诊疗现状不容乐观，造成了沉重的疾病和经济负担。规范治疗是提高诊断率和治疗率的关键，而研发更有效的抗HBV治疗方法又是重中之重，也是能否实现WHO提出的2030年消除乙肝目标的重要前提。

发明内容

针对现有技术中的问题，本发明提供了一种鸭胆子油乳浊液，并以该乳浊液进行靶向抑制效果，达到抑制乙肝病毒的效果。

为实现以上技术目的，本发明的技术方案是：

一种鸭胆子油乳浊液，采用如下步骤制备：

步骤1，将甘油和吐温-80加入至鸭胆子油溶液中，搅拌均匀，且在搅拌过程中加入无菌水，过滤得到鸦胆子油药液；

步骤2，将鸭胆子油药液经微孔滤膜灭菌后得到鸭胆子油乳剂成品，经DMEM培养基稀释，得到鸦胆子油乳浊液。

进一步的，所述鸭胆子油乳浊液在4℃下保存备用。

所述鸭胆子油乳浊液以HepG2.215/HepG2/Huh7细胞悬液为细胞液，以比对的方式进行细胞毒性测试。所述HepG2.215：野生型HBV的2倍体基因组(5'-3'-3'-5'，共4个5'-3'串联拷贝)插入HepG2基因组中，HBV可以稳定的在细胞中复制、抗原表达，可产生22nm的球形及管型颗粒和42nm的Dane氏颗粒。所述HepG2和Huh7：人肝癌细胞系，细胞本身均为HBV阴性，转染野生型或突变型HBV的复制子质粒(包含1.3倍HBV基因组，保证高度重叠的HBV的S、C、P、X四个ORF的完整性)后，HBV可以稳定的在细胞中复制、转录、表达抗原，产生22nm的球形及管型颗粒和42nm的Dane氏颗粒。HepG2：人肝癌细胞系，来源于一个15岁男性白人的肝癌组织。该细胞分泌多种血浆蛋白：清蛋白、α2-巨球蛋白、血纤维蛋白溶酶原、铁传递蛋白等，HBV阴性。Huh7：人肝癌细胞系，是由Naka-bayashi等人建立的，细胞源自一个日本男性高分化肝细胞肝癌，HBV阴性。

所述鸭胆子油乳浊液在靶向抑制乙肝病毒领域的应用。

进一步的，所述鸦胆子油乳浊液在HBsAg和HBeAg的抑制的应用。

进一步的，所述鸭胆子油乳浊液用于乙肝病毒复制的靶向抑制。

进一步的，所述鸭胆子油乳浊用于乙肝突变株的靶向抑制。