[发明专利]一种肾癌循环肿瘤细胞系及获取分离及培养方法

说明书

本发明提供一种肾癌循环肿瘤细胞系及获取分离及培养方法，其方法步骤包括：建立稳转人源性肾癌细胞系786‑O，用病毒感染人源性肾癌细胞系786‑O，使其稳转绿色荧光蛋白、荧光素酶、并具有Puromycin抗性，并对该人源性肾癌细胞786‑O进行培养；制备循环肿瘤细胞动物模型，将步骤S1中培养获得的人源性肾癌细胞786‑O通过尾静脉注射于小鼠体内，小鼠于SPF环境下饲养一个月，并通过小动物成像观察是否发生转移；循环肿瘤细胞的细胞系提取，采集步骤S2中已经发生转移的小鼠外周血并进行分离、培养得到肾癌循环肿瘤细胞；对步骤S3中获得的循环肿瘤细胞进行培养。本发明简单易操作，成功率高，成本低，且获得的循环肿瘤细胞纯度极高，细胞状态好，可以广泛应用于临床研究。

技术领域

本发明属于肿瘤细胞的分离与培养技术领域，具体涉及一种肾癌循环肿瘤细胞系及获取分离及培养方法。

背景技术

循环肿瘤细胞作为播散进入循环血液中的肿瘤细胞，在癌症的发展过程中起着极其重要的作用。在疾病的早期阶段，循环肿瘤细胞发生上皮间质化从而获得侵袭能力，进而在免疫细胞的帮助下进入循环血液中，到达远端器官后进入休眠状态。随着肿瘤的进展，最终在一定条件下复苏发生转移。针对循环肿瘤细胞的捕获技术，也从最初的抗体捕获，发展至根据循环肿瘤细胞的物理特性捕获，以及整合两种捕获方法于一体的新技术。新技术的出现提高了肿瘤细胞捕获的准确性，高效性。丰富了人们对循环肿瘤细胞的认识，使人们从分子、机制方面对循环肿瘤细胞的研究成为可能。CTC动物模型的制备以及细胞系的制备在基础研究中起着关键性作用。然而目前为止，已有的肾癌循环肿瘤细胞动物模型制作以及循环肿瘤细胞的获取步骤过于繁琐，时间成本经济成本较高，且提取过程会对数量稀少的循环肿瘤细胞造成损伤，影响循环肿瘤细胞的细胞状态及获取率。

如申请人申请号为202010280911.X的在先申请，提供一种小鼠肾透明细胞癌循环肿瘤细胞系和人源性肾透明细胞癌循环肿瘤细胞的分离与培养方法，其步骤包括：S1：用病毒感染人源性肾透明细胞癌细胞系786-O，使其稳转绿色荧光蛋白和具有Puromycin抗性，并对该人源性肾透明细胞癌细胞系786-O进行培养； S2：将步骤S1中培养获得的人源性肾透明细胞癌细胞系786-O接种于小鼠腋下以获得肿瘤块；S3：将步骤S2中的肿瘤块接种于另一只健康小鼠的肾包膜下并进行饲养；S4：采集步骤S3中小鼠外周血并进行培养、分离得到循环肿瘤细胞。该方法分离获得的循环肿瘤细胞可以进行正常的传代培养，可以应用于临床研究，但在循环肿瘤细胞动物模型制备和循环肿瘤细胞细胞系提取中仍存在小鼠成活率低，造模成功率低，经济成本高，操作步骤复杂等缺陷。

发明内容

本发明提供一种肾癌循环肿瘤细胞系及获取分离及培养方法，方法简单易操作，时间及经济成本较低，分离获得的循环肿瘤细胞状态良好获取率高，且无需特殊培养设备及条件，可直接广泛应用于循环肿瘤细胞的基础研究。

本发明的技术方案是：一种肾癌循环肿瘤细胞系，为肾癌细胞的循环肿瘤细胞786-O-CTC，于2020.9.29日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉，保藏编号为 CCTCC NO:C2020193。

一种肾癌循环肿瘤细胞系获取分离及培养方法，其步骤包括：

S1：建立稳转人源性肾癌细胞系786-O，用病毒感染人源性肾癌细胞系 786-O，使其稳转绿色荧光蛋白、荧光素酶、并具有Puromycin抗性，并对该人源性肾癌细胞786-O进行培养；

S2：制备循环肿瘤细胞动物模型，将步骤S1中培养获得的人源性肾癌细胞 786-O通过尾静脉注射于小鼠体内，小鼠于SPF环境下饲养一个月，并通过小动物成像观察是否发生转移；

S3：循环肿瘤细胞细胞系提取，采集步骤S2中已经发生转移的小鼠外周血并进行分离、培养得到肾癌循环肿瘤细胞；

S4：对步骤S3中获得的循环肿瘤细胞进行培养。

方案进一步地，上述步骤S1的具体过程为：