[发明专利]TfR1肺组织特异性敲除小鼠模型及其构建方法和应用

权利要求书

1.TfR1肺组织特异性敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、将TfR1^-/-转基因小鼠和Sftpc-CreERT2转基因小鼠进行杂交，得到F1代，经鉴定，基因型分别为TfR1^+/-；Sftpc-CreERT2和TfR1^+/-；

步骤二、将F1代TfR1^+/-；Sftpc-CreERT2转基因小鼠和F1代TfR1^+/-转基因小鼠进行杂交，得到F2代，经鉴定，基因型分别为TfR1^+/-；Sftpc-CreERT2、TfR1^+/+；Sftpc-CreERT2和TfR1^+/+；

步骤三、将F2代TfR1^+/-；Sftpc-CreERT2转基因小鼠进行杂交，经鉴定，得到F3代TfR1^-/-；Sftpc-CreERT2纯合子基因敲除小鼠，即TfR1肺组织特异性敲除小鼠模型。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤一中，F1代小鼠基因型鉴定过程如下：

(1)PCR

TfR1^-/-转基因小鼠基因型鉴定引物序列如下：

TfR1^-/-F：TTCAGTTCCCAGTGACCACA；

TfR1^-/-R：TCCTTTCTGTGCCCAGTTCT；

Sftpc-CreERT2转基因小鼠基因型鉴定引物序列如下：

Sftpc-CreERT2(1)：ACACCGGCCTTATTCCAAG；

Sftpc-CreERT2(2)：TGCTTCACAGGGTCGGTAG；

Sftpc-CreERT2(3)：CATTACCTGGGGTAGGACCA；

扩增反应体系20μL，其中，ddH₂O 7μL、2×Taq Plus Master Mix 10μL、DNA模板1μL、引物各1μL；

反应条件：94℃3min，94℃30s，60℃30s，72℃1min，重复3个步骤35个循环，72℃5min，12℃保持；

(2)琼脂糖凝胶电泳

PCR扩增产物经1％琼脂糖凝胶电泳；

TfR1^-/-基因敲除结果判定指标：出现约165bp条带的为野生型小鼠，出现约310bp条带的为转基因小鼠；

Sftpc-CreERT2基因敲除结果判定指标：出现约327bp条带的为野生型小鼠，出现约210bp条带的为转基因小鼠；

(3)TfR1基因型鉴定结果为：F1代小鼠全部显示165bp和310bp双条带，F1代全部为杂合子小鼠，基因型为TfR1^+/-；

Sftpc-CreERT2基因型鉴定结果为：一部分F1代小鼠显示210bp和327bp双条带，为杂合子小鼠，基因型为TfR1^+/-；Sftpc-CreERT2；另一部分F1代小鼠只显示327bp条带，为野生型小鼠，基因型为TfR1^+/-。